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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 289KDa的蛋白的转膜条件
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herjasmine

新虫 (初入文坛)

[求助] 289KDa的蛋白的转膜条件

最近在做m-TOR蛋白（分子量是289KDa），做了两周了都做不出来。电泳是恒压100V，3h；转膜是恒流200mA，3h。每次转膜后不是没有marker了，就是做完了marker还在胶上（还有一次转膜完后发现maker在滤纸上了）。总之就是转膜时总有问题。有知道的同仁能给点好的建议吗？谢谢啦！
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1楼 2013-07-14 22:47:52
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-15 10:59:12
转膜时候的电压调小一些吧，或者再加一些增强膜透性的物质，可能是因为电流不稳定。
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2楼2013-07-15 07:45:45
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张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-15 10:59:26
感觉转膜时间有点短，延长时间试一下。

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2013-07-15 09:11:30
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-15 07:45:45
转膜时候的电压调小一些吧，或者再加一些增强膜透性的物质，可能是因为电流不稳定。

谢谢你！我现在已经做出条带了，确实存在电流不稳定的情况，但我不确定之前做不出来是否与这有关。我现在的条件是转膜恒流300mA转140min。还是谢谢你！
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4楼2013-07-17 09:46:09
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王耀晨01

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by herjasmine at 2013-07-17 09:46:09
谢谢你！我现在已经做出条带了，确实存在电流不稳定的情况，但我不确定之前做不出来是否与这有关。我现在的条件是转膜恒流300mA转140min。还是谢谢你！...

您好，我现在也要做m-TOR，请问您用的什么marker？Thermo货号为26625，,4-300kda的marker可以吗？转膜条件是什么？非常感谢，在线等。。
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5楼2015-05-12 17:24:27
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