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张贝贝123

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么SmaI酶切不开川贝母PCR的DNA

大神们，最近我PCR扩增了川贝母的DNA，用SmaI，酶切，但是切不动，体系是
smaI   1 微升
BSA  2 微升
10×T buffer 2微升
pcr溶液  5 微升
水    15微升
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我的未来我做主
1楼 2013-07-14 10:32:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-14 12:17:53
确定PCR产物里有SmaI位点？酶没有问题吗？
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2楼2013-07-14 11:47:21
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-14 12:18:04
换一种酶试试，看你加的料没什么问题，应该是反应时间或者底物的纯度吧
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3楼2013-07-14 11:51:32
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张贝贝123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-14 11:47:21
确定PCR产物里有SmaI位点？酶没有问题吗？

这是中国药典里的，应该有酶切位点，酶肯定没什么问题，不知道问题出在哪了
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我的未来我做主
4楼2013-07-14 14:11:47
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张贝贝123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-14 11:51:32
换一种酶试试，看你加的料没什么问题，应该是反应时间或者底物的纯度吧

就指定用这种酶的，反应时间我从半个小时一直试到过夜。都不行，我是刚做分子的，不太懂
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我的未来我做主
5楼2013-07-14 14:13:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 张贝贝123 at 2013-07-14 14:11:47
这是中国药典里的，应该有酶切位点，酶肯定没什么问题，不知道问题出在哪了...

试试把PCR产物纯化一下再切。
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6楼2013-07-14 23:37:35
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liwenting05

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的川贝来源是否是正品呢？不是正品的话是切不动的吧
我们用的条件是：
pcr反应溶液 10ul
smaI 0.5ul
10xbuffer 2ul
ddH2O 7.5ul
水浴25度 3小时
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7楼2013-08-21 14:52:59
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