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yiren12689

新虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by zy_696969 at 2014-03-07 13:15:27
嗯,产同源重组酶的质粒是pKD46,线性打靶片段是以pKD3为模板的。...

有用过PDM4自杀质粒做过的吗?
11楼2014-03-10 15:49:51
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zy_696969

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by yiren12689 at 2014-03-10 15:49:51
有用过PDM4自杀质粒做过的吗?...

没有用过。
12楼2014-03-11 08:44:33
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蝶影拂袖

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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10楼: Originally posted by yiren12689 at 2014-03-10 15:49:17
电转的话,用甘油法做感受态,我感觉甘油法没有氯化钙法效果好?
感受态细胞和线性DNA大概多少比例关系?DNA浓度得达到多少?
电转仪参数是不是有要求?...

我们的电转感受态也是用甘油做的,线性 片段浓度要达到100 ng / µl ,用量1-2 µl ,感受态细胞最好浓度大点
13楼2014-03-11 12:58:31
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.关于感受态细胞的问题,个人建议。制备成电转感受态细胞,这样的转化成功率比较高;
2.关于L-阿拉伯糖诱导的问题。因为这个东西极易消旋,所以,一般是要用的时候再配,而且这个制备的感受态一定要控制好OD600值,不要让细胞长过了,在指数期就是最好的,一般E.coli用的是0.5~0.6之间;
3.同源臂转化的问题,有几篇文章里面谈到过同源臂量以及长度对这个转化效率的影响,但是综合来说,如果是E.coli影响并不是很大,长度一般50bp就够了,主要是你前期那个电转感受态细胞,如果那个制备得好,后面就不会出现太大问题。
       小弟愚见!
14楼2015-12-10 15:44:48
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CM799183890

禁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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15楼2016-01-08 15:33:57
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CM799183890

禁虫 (初入文坛)

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16楼2016-01-08 15:34:40
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liduanyou

禁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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17楼2018-05-09 21:21:12
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