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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 畜牧兽医 » 做过RED同源重组的大侠们请进！
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yiren12689

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by zy_696969 at 2014-03-07 13:15:27
嗯，产同源重组酶的质粒是pKD46，线性打靶片段是以pKD3为模板的。...

有用过PDM4自杀质粒做过的吗？
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11楼2014-03-10 15:49:51
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zy_696969

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yiren12689 at 2014-03-10 15:49:51
有用过PDM4自杀质粒做过的吗？...

没有用过。
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12楼2014-03-11 08:44:33
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蝶影拂袖

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by yiren12689 at 2014-03-10 15:49:17
电转的话，用甘油法做感受态，我感觉甘油法没有氯化钙法效果好？
感受态细胞和线性DNA大概多少比例关系？DNA浓度得达到多少？
电转仪参数是不是有要求？...

我们的电转感受态也是用甘油做的，线性 片段浓度要达到100 ng / µl ，用量1-2 µl ，感受态细胞最好浓度大点
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13楼2014-03-11 12:58:31
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1.关于感受态细胞的问题，个人建议。制备成电转感受态细胞，这样的转化成功率比较高；
2.关于L-阿拉伯糖诱导的问题。因为这个东西极易消旋，所以，一般是要用的时候再配，而且这个制备的感受态一定要控制好OD600值，不要让细胞长过了，在指数期就是最好的，一般E.coli用的是0.5~0.6之间；
3.同源臂转化的问题，有几篇文章里面谈到过同源臂量以及长度对这个转化效率的影响，但是综合来说，如果是E.coli影响并不是很大，长度一般50bp就够了，主要是你前期那个电转感受态细胞，如果那个制备得好，后面就不会出现太大问题。
       小弟愚见！
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14楼2015-12-10 15:44:48
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CM799183890

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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15楼2016-01-08 15:33:57
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CM799183890

禁虫 (初入文坛)
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16楼2016-01-08 15:34:40
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liduanyou

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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17楼2018-05-09 21:21:12
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