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做过RED同源重组的大侠们请进！已有5人参与
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| 做过RED同源重组的大侠们请进，PKD46拷贝数低，提出的量总是不高，怎么转也转不到我的目的菌迟缓爱德华菌里面去，我用的氯化钙法，也不知道是不是感受态的问题怎么办啊，做好长时间做不出来，不知道是什么问题啊？ |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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1.关于感受态细胞的问题，个人建议。制备成电转感受态细胞，这样的转化成功率比较高； 2.关于L-阿拉伯糖诱导的问题。因为这个东西极易消旋，所以，一般是要用的时候再配，而且这个制备的感受态一定要控制好OD600值，不要让细胞长过了，在指数期就是最好的，一般E.coli用的是0.5~0.6之间； 3.同源臂转化的问题，有几篇文章里面谈到过同源臂量以及长度对这个转化效率的影响，但是综合来说，如果是E.coli影响并不是很大，长度一般50bp就够了，主要是你前期那个电转感受态细胞，如果那个制备得好，后面就不会出现太大问题。 小弟愚见！ |
14楼2015-12-10 15:44:48
zy_696969
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 性别: MM
- 专业: 生物化学
2楼2013-10-14 15:09:01
3楼2014-02-27 17:12:10
4楼2014-03-06 10:16:08