应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WB结果杂不出目的条带，只有特别亮的非特异性条带，求高手解释原因
51/1返回列表
查看: 3872  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

浮帅古

铜虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢
1楼 2013-07-08 09:51:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浮帅古

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-09 00:42:08
根据你所说的和我的理解，阳性对照用的是细胞样品，不是鸡的样品？而且你在目的蛋白上融合了GFP，所以用GFP抗体检测？如果是这样，你可以用GFP特异荧光检测目标蛋白的表达情况。...

cicelyzh老师很在行，我没有用鸡的样品做对照，因为用的广泛启动子在鸡上表达很弱。
我试过看蛋里的荧光，可能是鸡蛋里其他蛋白和脂肪类的干扰，没有看到荧光。
我的计划是做WB定性，然后做ELISA来定量，做了一次ELISA但是没出来，所有又回到WB想先做出个结果。
赞一下 回复此楼
努力爱！
7楼2013-07-09 08:57:24
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-08 16:27:29
silicare: BioEPI+1 2013-07-09 09:47:57
我想先问一下你的阳性对照是什么，各个样品又是什么。你如何确定样品中的是非特异条带？抗体是自己做还是公司买的现成抗体？
做western有非特异条带也是很正常的，有时候的确是非特异带比目标蛋白带的信号强。蛋白样品的反复冻融对有些蛋白来说可能会降解比较严重，也可能导致western失败。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-08 14:02:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浮帅古

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-08 14:02:18
我想先问一下你的阳性对照是什么，各个样品又是什么。你如何确定样品中的是非特异条带？抗体是自己做还是公司买的现成抗体？
做western有非特异条带也是很正常的，有时候的确是非特异带比目标蛋白带的信号强。蛋白 ...

我的实验是用慢病毒制备转基因鸡，阳性对照是细胞实验时用病毒感染细胞后提取的蛋白，后来在鸡的组织蛋白样品中杂到与细胞实验相同的条带，所以认定这段时间杂出的下面那排很粗的是非特异性条带。
       这段时间WB样品用的是从鸡蛋里提的蛋白，我分别用PEG6000和氯仿两种方法提取，PEG法始终未杂出目的条带，氯仿法提的就杂出一次如图的条带。GFP抗体是买的博尔迈公司的，杂浓度很低的标准品都没问题的。
     蛋白样品反复冻融确实会降解，但是我只冻融两次应该不会完全降解啊，而且样品溶解都是插在冰盒里的。我又重新提蛋白的还没杂出来，过一个月就该汇报工作了，很焦急。
赞一下 回复此楼
努力爱！
3楼2013-07-08 14:19:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浮帅古

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-08 14:02:18
我想先问一下你的阳性对照是什么，各个样品又是什么。你如何确定样品中的是非特异条带？抗体是自己做还是公司买的现成抗体？
做western有非特异条带也是很正常的，有时候的确是非特异带比目标蛋白带的信号强。蛋白 ...

PS，这个非特异性条带出现在CK和样品孔，而阳性对照都没出现，小硕水平有限，请不吝赐教啊
赞一下 回复此楼
努力爱！
4楼2013-07-08 14:33:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +6 慕寒mio 2026-03-16 6/300 2026-03-18 14:26 by 007_lilei
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-13 6/300 2026-03-18 14:14 by 脱颖而出
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭