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wuqiyang168

木虫 (正式写手)

[求助] 酶解多糖以及寡糖分析

本人要做多糖酶解实验,对于酶解条件控制,寡糖分析都比较模糊,敢问各位前辈传授下经验,拜谢!
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liweixiaoye

至尊木虫 (著名写手)

正股级巡视员

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wuqiyang168: 金币+10, ★★★很有帮助, thanks 2013-07-01 08:22:16
多糖用酶解的方法,效率一般不高,水解率在30%左右,最好结合几种外切糖苷酶来水解,最主要的几个酶解条件是温度、PH、底物(多糖)浓度、酶浓度和酶解时间,一般条件优化也是围绕这几个条件展开,另外多糖水解最主要是要控制水解度的问题,也就是水解地位低聚糖的聚合度,一般聚合度在15个蛋汤一下活性较高,但基本的空间构型丢失,可采取一定活性保持技术对其保护,检测时用HPLC接示差折光检测器或蒸发光散射检测器可对糖分子进行检测,一般用正向色谱柱(氨基柱,如SUGAR-D或日本东曹达TOSHO的柱子都可以有很好的分离)但检出限最低的是离子色谱,可用戴安的离子色谱,条件须掌握好。希望对你有帮助
人生短短几个秋,不醉不罢休!
4楼2013-06-30 16:19:12
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恋上紫色

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wuqiyang168: 金币+10, 有帮助, thanks 2013-06-29 08:43:48
我也做这个,酶解条件要自己摸索吧,分析多采用薄板等,多看看中英文文献吧,一起努力!
2楼2013-06-28 15:14:08
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武安人

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wuqiyang168: 金币+10, 有帮助 2013-06-29 15:53:37
结合稀酸水解。
使用安捷伦Hi-Plex H柱,或者伯乐的87H柱分析。结果较好。
第一时间消除未知
3楼2013-06-29 13:26:15
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wuqiyang168

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liweixiaoye at 2013-06-30 16:19:12
多糖用酶解的方法,效率一般不高,水解率在30%左右,最好结合几种外切糖苷酶来水解,最主要的几个酶解条件是温度、PH、底物(多糖)浓度、酶浓度和酶解时间,一般条件优化也是围绕这几个条件展开,另外多糖水解最主 ...

一般用什么酶水解呢?酶解后的产物如何鉴定,也就是如何鉴定水解程度?另外如果不用酶解,何种方法比较合适?酸解还是碱碱?
5楼2013-07-01 08:30:29
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