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wuqiyang168木虫 (正式写手)
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[求助]
酶解多糖以及寡糖分析
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本人要做多糖酶解实验，对于酶解条件控制，寡糖分析都比较模糊，敢问各位前辈传授下经验，拜谢！ |
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2楼2013-06-28 15:14:08
3楼2013-06-29 13:26:15
liweixiaoye
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wuqiyang168: 金币+10, ★★★很有帮助, thanks 2013-07-01 08:22:16
感谢参与，应助指数 +1
wuqiyang168: 金币+10, ★★★很有帮助, thanks 2013-07-01 08:22:16
| 多糖用酶解的方法，效率一般不高，水解率在30%左右，最好结合几种外切糖苷酶来水解，最主要的几个酶解条件是温度、PH、底物（多糖）浓度、酶浓度和酶解时间，一般条件优化也是围绕这几个条件展开，另外多糖水解最主要是要控制水解度的问题，也就是水解地位低聚糖的聚合度，一般聚合度在15个蛋汤一下活性较高，但基本的空间构型丢失，可采取一定活性保持技术对其保护，检测时用HPLC接示差折光检测器或蒸发光散射检测器可对糖分子进行检测，一般用正向色谱柱（氨基柱，如SUGAR-D或日本东曹达TOSHO的柱子都可以有很好的分离）但检出限最低的是离子色谱，可用戴安的离子色谱，条件须掌握好。希望对你有帮助 |
4楼2013-06-30 16:19:12
wuqiyang168
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5楼2013-07-01 08:30:29
liweixiaoye
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【答案】应助回帖
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酶的选择要根据你的糖苷键类型和单糖组成来确定，比如你的多糖中有Gal、Glc、Fru、Ara四种蛋汤是以BETA1-4糖苷键相连的，想要得到其中含Gal、Fru、Ara三种单糖的低聚糖，那就应该选择内切的BETA1-4半乳糖苷酶来水解，同理想要得到其他的，也可以这种方法操作； 简单的水解度可以用透析的方法确定，通过制作标准曲线，定量测定透析结束后，透析袋中多糖的量，因为低聚糖和单糖已经被透析出去了，或者利用HPLC-GPC的方法可以非常准确的定量； 如果不用酶解得得方法可以选择酸水解的方式，可以用TFA，约80摄氏度水解，控制反应时间，必要时降低温度，可以有比较好的效果，缺点是有的时候付男性的果糖会被分解掉，因此这种方法不适合水解果聚糖。 |
6楼2013-07-01 20:59:59
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