应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 转化
81/1返回列表
查看: 1220  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

499649610

金虫 (小有名气)

[求助] 转化

做菊欧文氏杆菌的基因敲除，我把重组质粒构建好了，问题是怎么无法转化到菊欧文氏杆菌杆菌里面去，我试过三亲杂交、化学转化法、电击转化法（电压1100v 时间 2ms  5次）都不成功。求指导！ 包括各种方法感受态细胞的制备和转化要注意的事项 或者三亲要注意的事项   如果可以的话 能否帮忙分析一下原因 谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-06-27 16:22:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的是0.2还是0.1的杯子？1100V是不是低了些？细菌一般都是2500V的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-28 00:22:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

499649610

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-28 00:22:03
你用的是0.2还是0.1的杯子？1100V是不是低了些？细菌一般都是2500V的。

0.2的
回复此楼
3楼2013-07-02 14:40:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 499649610 at 2013-07-02 14:40:11
0.2的...

对你用的宿主不是很清楚。一般做电转化是在给完电激后应立即加入培养液复苏，否则会有很多死亡的。三亲接合转化主要是宿主的生长状态，菌不宜太老。接合质粒菌和helper菌最好是用过夜培养的菌液活化后使用。离心和重悬操作比较温柔。
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-02 23:53:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

499649610

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-02 23:53:58
对你用的宿主不是很清楚。一般做电转化是在给完电激后应立即加入培养液复苏，否则会有很多死亡的。三亲接合转化主要是宿主的生长状态，菌不宜太老。接合质粒菌和helper菌最好是用过夜培养的菌液活化后使用。离心和 ...

谢！我质粒的宿主菌是大肠杆菌CC118，要转到野生型菌菊欧文氏杆菌中间去。质粒为PKNG。菊欧文氏菌生长速度较慢，我一般是第一天中午就活化它，然后大肠杆菌是过夜培养。我把三种菌在平板上划得很密，然后用接种环刮取一定量的菌株，把三种菌株混匀，置于新的LB平板上，共培养8小时及以上，但是未能得到结果！
点击完以后，我有加入SOB静置两个小时，再涂板，但是未能有菌长出！
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-03 21:28:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 499649610 at 2013-07-03 21:28:44
谢！我质粒的宿主菌是大肠杆菌CC118，要转到野生型菌菊欧文氏杆菌中间去。质粒为PKNG。菊欧文氏菌生长速度较慢，我一般是第一天中午就活化它，然后大肠杆菌是过夜培养。我把三种菌在平板上划得很密，然后用接种环刮 ...

我做三亲转移的时候，宿主菌和大肠杆菌都是液体培养。大肠杆菌液体培养过夜后第二天再用液体活化至对数期。离心后用无抗的LB重悬，把这两个菌1:1混合后再与宿主菌混合，宿主菌做三个稀释梯度。然后涂板。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-03 23:01:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

499649610

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 23:01:09
我做三亲转移的时候，宿主菌和大肠杆菌都是液体培养。大肠杆菌液体培养过夜后第二天再用液体活化至对数期。离心后用无抗的LB重悬，把这两个菌1:1混合后再与宿主菌混合，宿主菌做三个稀释梯度。然后涂板。...

我也有试过液体培养 但是 也是一样的效果
赞一下 回复此楼
7楼2013-07-04 19:24:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 499649610 at 2013-07-04 19:24:37
我也有试过液体培养 但是 也是一样的效果...

实在不清楚你做的宿主，你有转化菊欧文氏杆菌的文献吗？可以借鉴人家成功的方法和技巧。
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-05 00:20:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 499649610 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:47 by 好好好1233
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 材料类求调剂 +9 wana_kiko 2026-02-28 10/500 2026-03-01 17:01 by sunny81
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭