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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wjw3188 at 2013-06-29 11:25:02
谢谢你的回复,我的酶没有问题,我把自然克隆至T载体上,能够切下来,连接到表达载体上,无论用特异引物还是载体通用引物,都能得到目标片段,用单酶切,大小也对,用载体上其他两个酶切位点进行双酶切,竟然也是对 ...

可以送测序看看是不是这两个酶切位点突变了。
11楼2013-06-29 23:13:01
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wjw3188

木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-29 23:13:01
可以送测序看看是不是这两个酶切位点突变了。...

我也是这么想的,也这么做了,等测序结果出来
志存高远,方能展翅高飞
12楼2013-06-30 09:59:38
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wjw3188 at 2013-06-29 11:25:02
谢谢你的回复,我的酶没有问题,我把自然克隆至T载体上,能够切下来,连接到表达载体上,无论用特异引物还是载体通用引物,都能得到目标片段,用单酶切,大小也对,用载体上其他两个酶切位点进行双酶切,竟然也是对 ...

楼主,我找到原因了,建议你看下感受态有无质粒污染,做三个对照,第一个感受态直接涂板,第二个切过后的载体和目的片段不加酶涂板,第三个切过后的载体,加酶涂板(不加目的片段)。因为回收的时候容易污染杂质粒,然后载体里面可能污染杂质粒或者切过火了,产生星号活性,连成切不开的质粒
13楼2013-07-01 09:07:32
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

那还切什么,直接做表达不就行了,不放心的话送去测下序
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
14楼2013-07-17 16:04:29
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