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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体构建
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wjw3188 at 2013-06-29 11:25:02
谢谢你的回复，我的酶没有问题，我把自然克隆至T载体上，能够切下来，连接到表达载体上，无论用特异引物还是载体通用引物，都能得到目标片段，用单酶切，大小也对，用载体上其他两个酶切位点进行双酶切，竟然也是对 ...

可以送测序看看是不是这两个酶切位点突变了。
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11楼2013-06-29 23:13:01
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wjw3188

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-29 23:13:01
可以送测序看看是不是这两个酶切位点突变了。...

我也是这么想的，也这么做了，等测序结果出来
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志存高远，方能展翅高飞
12楼2013-06-30 09:59:38
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wjw3188 at 2013-06-29 11:25:02
谢谢你的回复，我的酶没有问题，我把自然克隆至T载体上，能够切下来，连接到表达载体上，无论用特异引物还是载体通用引物，都能得到目标片段，用单酶切，大小也对，用载体上其他两个酶切位点进行双酶切，竟然也是对 ...

楼主，我找到原因了，建议你看下感受态有无质粒污染，做三个对照，第一个感受态直接涂板，第二个切过后的载体和目的片段不加酶涂板，第三个切过后的载体，加酶涂板（不加目的片段）。因为回收的时候容易污染杂质粒，然后载体里面可能污染杂质粒或者切过火了，产生星号活性，连成切不开的质粒
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13楼2013-07-01 09:07:32
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

那还切什么，直接做表达不就行了，不放心的话送去测下序
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
14楼2013-07-17 16:04:29
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