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wjw3188木虫 (著名写手)
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[求助]
表达载体构建
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大家好，最近做表达出现了一点问题：首先，我将片段连接到T载体上，然后用相应酶（Bgl I 和Kpn I）酶切下来，回收后连接到载体pET-32a上，用T7引物PCR扩增，有目标条带，且单一明亮，可是提取质粒后，用同样的酶进行双酶切却切不开，不知道为什么？？？当初选择酶切位点的时候请教了别人，告诉我pET-32a上的酶切位点可以挨着，因为觉得保证载体的完整性会好一点，所以我就选择了两个挨着的酶切位点，现在切不开是不是因为这个，还是其他原因？求高手解答！！ [ 来自小组 Rose Family ] |
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