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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 胶回收

我这几天在做从凝胶中回收DNA试验，可是在紫外下检测没有条带，什么都没回收到，这是什么原因啊？我是按照试验试剂盒的操作流程一步步来的，实在找不到是什么原因了，麻烦大家帮我分析一下吧。！
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼 2013-06-16 18:19:01
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byang0904

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖应助！ 2013-06-16 20:57:30
如果你确定是加了EB的话，那么最可能的就是你pcr没扩增出来条带，可能是引物的问题
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2楼2013-06-16 20:00:23
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张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是先将目的条带切下来后进行的胶回收吧？切胶的时候亮度如何？如果量比较少的话，再加上回收过程中会损失一些，导致回收到的DNA很少。
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3楼2013-06-16 21:13:53
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是没有回收到，切快点，凉了之后再过柱，嗯，硅胶膜低PH高盐条件下吸附DNA效果好，所以有一步怕溶液PH过高，可以添加醋酸钠
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4楼2013-06-16 21:14:16
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先，保证回收量够，我以前用45微升PCR产物回收的，回收后可用琼脂糖凝胶电泳检测。
其次， 切胶不要切偏，保证切到目的片段而不附带多余胶，不要在紫外下暴露太长时间，熔胶要均匀，彻底熔融。
再次，试剂盒是否有效？你要看清楚，有些试剂要自行加乙醇或混匀的，别漏了哦
最后，电泳无条带不一定你没回收到，可能量太少，你回收看用途是什么，例如用于克隆连接，量很少就行。
望对你有用！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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思路决定出路。。。
5楼2013-06-16 21:46:45
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