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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 胶回收

我这几天在做从凝胶中回收DNA试验,可是在紫外下检测没有条带,什么都没回收到,这是什么原因啊?我是按照试验试剂盒的操作流程一步步来的,实在找不到是什么原因了,麻烦大家帮我分析一下吧。!
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每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
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byang0904

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖应助! 2013-06-16 20:57:30
如果你确定是加了EB的话,那么最可能的就是你pcr没扩增出来条带,可能是引物的问题
2楼2013-06-16 20:00:23
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张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是先将目的条带切下来后进行的胶回收吧?切胶的时候亮度如何?如果量比较少的话,再加上回收过程中会损失一些,导致回收到的DNA很少。
3楼2013-06-16 21:13:53
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是没有回收到,切快点,凉了之后再过柱,嗯,硅胶膜低PH高盐条件下吸附DNA效果好,所以有一步怕溶液PH过高,可以添加醋酸钠
4楼2013-06-16 21:14:16
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先,保证回收量够,我以前用45微升PCR产物回收的,回收后可用琼脂糖凝胶电泳检测。
其次, 切胶不要切偏,保证切到目的片段而不附带多余胶,不要在紫外下暴露太长时间,熔胶要均匀,彻底熔融。
再次,试剂盒是否有效?你要看清楚,有些试剂要自行加乙醇或混匀的,别漏了哦
最后,电泳无条带不一定你没回收到,可能量太少,你回收看用途是什么,例如用于克隆连接,量很少就行。
望对你有用!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
思路决定出路。。。
5楼2013-06-16 21:46:45
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