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gwzjiayou

金虫 (小有名气)

[求助] 自己设计RNA建库用index primer(illumina)PCR扩增效率低

针对RNA-seq,illumina官方公布的是24种index序列,实验室用的是NEB的RNA建库试剂盒,里面也只有24种index,现在这些index不够用,所以实验室自己合成了两个index primer(序列是根据small RNA建库试剂盒的index设计的)。
      用同样的样本建库,在最后PCR扩增时比较试剂盒index和自合成index primer的扩增效率,发现自合成index primer的扩增效率总是很低,实验方法都一样,只是6个碱基的差别(index序列),为什么自合成index primer扩增总是低呢?

[ Last edited by gwzjiayou on 2013-6-14 at 15:18 ]
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-15 21:30:11
gwzjiayou: 金币+3, 有帮助, 额,可是我们没打算用truseq的试剂盒,还是谢谢啦 2013-06-20 15:33:31
illumina的TruSeq Stranded mRNA HT和 TruSeq Stranded total RNA HT 都是有96种index的,应该足够你这次试验用的,不需要纠结自己合成了
2楼2013-06-15 08:40:35
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