| 查看: 5773 | 回复: 51 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
sherrysure银虫 (小有名气)
|
[求助]
我的蛋白序列鉴定都是正确的，可是为什么就是不表达，是为什么呢？附SDS-PAGE图
|
|||
|
这3个月一直在做蛋白表达， 但是一直没有成功。 我是这样做的： 把扩增出来的目的条带连接到pMD18TSimple，转化到Top10； 选择PCR与测序鉴定结果都正确的阳性菌液，提质粒，酶切，回收目的条带； 酶切后目的条带连接到pET30a载体，转化到Rosetta； 菌液PCR和测序鉴定结果正确的阳性菌液扩大培养，在0、2、4、6、8h取样做SDS-PAGE； 得到的结果就是没有结果  期间也试过以下表达载体：pET28b、pET30a、pET32a 选择的酶切位点是BamHI、XhoI，都对应载体图谱数过，不会存在移码的问题。 分别也都尝试过感受态：BL21、Rosetta 但是结果都是不表达，跑出来与上面类似的图 迫切寻求帮助，请求高手指导~~感激不尽！  page.jpg [ Last edited by sherrysure on 2013-6-6 at 14:47 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 核酸生物学实验经验 | 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有223人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如果在NCBI上查得的序列是某个蛋白mRNA的partial cds，那能做克隆表达吗
已经有4人回复
- 序列比对软件的选择和进化树制作
已经有9人回复
- 目的蛋白序列连接pet15b测序结果正确为何不表达
已经有7人回复
- 蛋白氨基酸序列分析及二、三、四级结构的鉴定
已经有33人回复
xiaoweiwei121
荣誉版主 (文坛精英)
这潭水蓝的深邃
- MolEPI: 5
- 应助: 18 (小学生)
- 贵宾: 39.097
- 金币: 106416
- 散金: 2773
- 红花: 197
- 沙发: 109
- 帖子: 35580
- 在线: 2157.8小时
- 虫号: 426591
- 注册: 2007-07-28
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
- 管辖: 虫友互识
4楼2013-06-06 23:59:39
linxt2005
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1250.3
- 红花: 2
- 帖子: 185
- 在线: 141.1小时
- 虫号: 2062910
- 注册: 2012-10-15
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2013-06-06 16:48:10
sherrysure
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1117.5
- 散金: 8
- 红花: 2
- 帖子: 121
- 在线: 82.4小时
- 虫号: 1285648
- 注册: 2011-05-04
- 专业: 兽医寄生虫学
3楼2013-06-06 18:20:27
dshlove
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 17
- 应助: 237 (大学生)
- 金币: 4764.7
- 散金: 20
- 红花: 10
- 帖子: 852
- 在线: 419.2小时
- 虫号: 1609389
- 注册: 2012-02-10
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
5楼2013-06-07 10:37:23
