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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶的硫酸铵沉淀
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dshlove

木虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by 天叶之羽 at 2013-06-09 21:31:51
你说的是那种用在离心管里的浓缩管么？？我问的是那种超滤仪。。不过都木有用过。。...

对，那种用在离心管里的浓缩管就是MILLIPORE的比较好的，使用很简单。
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11楼2013-06-13 08:55:47
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天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by dshlove at 2013-06-13 08:55:47
对，那种用在离心管里的浓缩管就是MILLIPORE的比较好的，使用很简单。...

enen,,但是好像每次处理量有点小，，我正在打算购买超滤膜包。。改用超滤浓缩。。硫酸铵沉淀太费劲了……
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12楼2013-06-13 18:17:44
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dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 天叶之羽 at 2013-06-13 18:17:44
enen,,但是好像每次处理量有点小，，我正在打算购买超滤膜包。。改用超滤浓缩。。硫酸铵沉淀太费劲了……...

说实话，小体积的话硫酸铵沉淀还是比较划算的。大体积的我们一般用切向流过滤先处理后再进行后续处理。
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13楼2013-06-14 09:12:01
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hahamei2008

银虫 (初入文坛)
我做过类似的实验，你首先的摸硫酸铵的浓度，看看多大浓度下目的蛋白会沉淀，然后再用你的buffer将沉淀下来的蛋白溶解，可以加适量的DOC（脱氧胆酸钠），在跑胶看看效果。
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加油
14楼2013-06-14 15:39:16
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天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by dshlove at 2013-06-14 09:12:01
说实话，小体积的话硫酸铵沉淀还是比较划算的。大体积的我们一般用切向流过滤先处理后再进行后续处理。...

一般要处理1L以上，感觉加硫酸铵有点难以操作了。我用100mL做预实验的时候80%的都加了半个小时。
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15楼2013-06-17 09:19:20
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天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by hahamei2008 at 2013-06-14 15:39:16
我做过类似的实验，你首先的摸硫酸铵的浓度，看看多大浓度下目的蛋白会沉淀，然后再用你的buffer将沉淀下来的蛋白溶解，可以加适量的DOC（脱氧胆酸钠），在跑胶看看效果。

这个摸浓度的已经操作过了，但是大部分目的蛋白还是留在上清液里，很难被沉淀下来。
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16楼2013-06-17 09:20:42
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dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 天叶之羽 at 2013-06-17 09:19:20
一般要处理1L以上，感觉加硫酸铵有点难以操作了。我用100mL做预实验的时候80%的都加了半个小时。...

嗯，我以前用饱和硫酸铵，用蠕动泵滴加，不用一直看着。
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17楼2013-06-17 12:15:26
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天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by dshlove at 2013-06-17 12:15:26
嗯，我以前用饱和硫酸铵，用蠕动泵滴加，不用一直看着。...

硫酸铵浓度大的话，，配成液体滴加会增加样品的体积，，这个问题要怎样解决好呢
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18楼2013-06-30 10:11:20
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dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 天叶之羽 at 2013-06-30 10:11:20
硫酸铵浓度大的话，，配成液体滴加会增加样品的体积，，这个问题要怎样解决好呢...

那样的话，你就要算上滴加液体的体积了。
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19楼2013-06-30 12:06:20
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