应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶的硫酸铵沉淀
52/1返回列表
查看: 3073  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

天叶之羽

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶的硫酸铵沉淀

我做的酶的纯化，打算首先采用硫酸铵沉淀法从发酵液中得到粗酶，但是硫酸铵浓度到90%，冰箱内过夜后，再8000g离心半小时后，目的酶基本还是在溶液里，没有沉淀出来！我看文献里基本到80%就沉淀出来了。
    现在我有两个疑问：1、是不是因为发酵液中蛋白含量太低（约0.1mg/mL），导致的目的酶在高硫酸氨浓度仍沉淀不出？怎样可以有效地酶没沉淀下来呢？
    2、超滤对酶活有很多损失吗？

希望能在这收集到大家的建议，帮助我实验顺利进行。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-06-05 19:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by dshlove at 2013-06-13 08:55:47
对，那种用在离心管里的浓缩管就是MILLIPORE的比较好的，使用很简单。...

enen,,但是好像每次处理量有点小，，我正在打算购买超滤膜包。。改用超滤浓缩。。硫酸铵沉淀太费劲了……
赞一下 回复此楼
12楼2013-06-13 18:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-06-06 07:43:57
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+1, 谢谢参与 2013-06-11 06:43:46
同一种酶的性质也是有不同的，别人的实验结果怎么说也是别人的，不一定自己的就也那样，以自己的实验结果为准。

超滤一般不会使酶活力有损失。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2013-06-06 03:23:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-06-06 03:23:17
同一种酶的性质也是有不同的，别人的实验结果怎么说也是别人的，不一定自己的就也那样，以自己的实验结果为准。

超滤一般不会使酶活力有损失。

发酵液需要浓缩后再用硫酸铵沉淀吗？这一步解决不了我的实验进行不下去。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-06 09:06:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sars2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2013-06-06 13:59:24
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+1, 谢谢参与 2013-06-11 06:44:00
粗酶液有几升？
硫酸铵沉淀在冰水浴中进行 我们实验室一般敲完硫酸铵冰水浴搅拌1h就可以了 放冰箱过夜效果不好
按理说蛋白量再少也会多少有些沉淀 是不是离心转速不够？我们实验室1W转10min 沉淀就可以出来

超滤要看酶而定，最好在低温下进行 而且 有些酶压力过大容易引起变性

我能想到的就这些 我是新手 有不足之处望请见谅。。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2013-06-06 11:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭