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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶的硫酸铵沉淀
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天叶之羽

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶的硫酸铵沉淀

我做的酶的纯化，打算首先采用硫酸铵沉淀法从发酵液中得到粗酶，但是硫酸铵浓度到90%，冰箱内过夜后，再8000g离心半小时后，目的酶基本还是在溶液里，没有沉淀出来！我看文献里基本到80%就沉淀出来了。
    现在我有两个疑问：1、是不是因为发酵液中蛋白含量太低（约0.1mg/mL），导致的目的酶在高硫酸氨浓度仍沉淀不出？怎样可以有效地酶没沉淀下来呢？
    2、超滤对酶活有很多损失吗？

希望能在这收集到大家的建议，帮助我实验顺利进行。
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1楼 2013-06-05 19:19:22
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天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by hahamei2008 at 2013-06-14 15:39:16
我做过类似的实验，你首先的摸硫酸铵的浓度，看看多大浓度下目的蛋白会沉淀，然后再用你的buffer将沉淀下来的蛋白溶解，可以加适量的DOC（脱氧胆酸钠），在跑胶看看效果。

这个摸浓度的已经操作过了，但是大部分目的蛋白还是留在上清液里，很难被沉淀下来。
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16楼2013-06-17 09:20:42
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-06-06 07:43:57
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+1, 谢谢参与 2013-06-11 06:43:46
同一种酶的性质也是有不同的，别人的实验结果怎么说也是别人的，不一定自己的就也那样，以自己的实验结果为准。

超滤一般不会使酶活力有损失。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2013-06-06 03:23:17
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天叶之羽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-06-06 03:23:17
同一种酶的性质也是有不同的，别人的实验结果怎么说也是别人的，不一定自己的就也那样，以自己的实验结果为准。

超滤一般不会使酶活力有损失。

发酵液需要浓缩后再用硫酸铵沉淀吗？这一步解决不了我的实验进行不下去。
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3楼2013-06-06 09:06:16
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sars2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2013-06-06 13:59:24
天叶之羽(wizardfan代发): 金币+1, 谢谢参与 2013-06-11 06:44:00
粗酶液有几升？
硫酸铵沉淀在冰水浴中进行 我们实验室一般敲完硫酸铵冰水浴搅拌1h就可以了 放冰箱过夜效果不好
按理说蛋白量再少也会多少有些沉淀 是不是离心转速不够？我们实验室1W转10min 沉淀就可以出来

超滤要看酶而定，最好在低温下进行 而且 有些酶压力过大容易引起变性

我能想到的就这些 我是新手 有不足之处望请见谅。。
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4楼2013-06-06 11:04:32
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