| 查看: 2227 | 回复: 12 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
echochen1017新虫 (初入文坛)
|
[求助]
提质粒酶切
|
||||
|
1、从BL21-pET28a-gene中提取质粒，有的提不出来，然后对提出来的酶切，pET28a居然在一个小时左右被切碎（电泳无条带，只有瀑布状的东西）。 2、将目的基因与pET28a连接，转化入BL21中，抗性筛选出菌落，培养，蛋白表达（量少，基本不表达），酶活检测，对底物具有活性，且重复三次结果一致，呈现质粒构建成功的状态，但是提质粒后，却没有条带，求大神解答！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有155人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24338.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-05 12:00:01
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-05 12:00:01
|
我觉得不适合从BL21菌株中提取质粒，BL21是个表达菌株，不妨可以分析一下其基因型，基因型如下： BL21(DE3) F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5]) DH5α F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK- mK+), λ– 通过将BL21(DE3)与DH5α比较，你会发现，BL21（DE3）中存在endA1和 recA1，这两个基因中前者编码核酸内切酶，后者编码重组酶，也就是说质粒转进BL21是不稳定的即容易被降解和重组 所以你从BL21中提取质粒，有的提不出来，对提出来的酶切，在一个小时左右被切碎（电泳无条带，只有瀑布状的东西）是很正常的 [ Last edited by gyesang on 2013-6-2 at 16:17 ] |
4楼2013-06-02 15:08:57
songzuowei
木虫 (著名写手)
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 2666.2
- 散金: 18
- 红花: 7
- 帖子: 2058
- 在线: 98.5小时
- 虫号: 2469387
- 注册: 2013-05-17
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2013-06-02 14:41:54
echochen1017
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 201
- 散金: 5
- 帖子: 45
- 在线: 45.7小时
- 虫号: 1684958
- 注册: 2012-03-12
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2013-06-02 14:59:57
songzuowei
木虫 (著名写手)
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 2666.2
- 散金: 18
- 红花: 7
- 帖子: 2058
- 在线: 98.5小时
- 虫号: 2469387
- 注册: 2013-05-17
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2013-06-02 15:15:57
