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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于taq酶的弱弱的问题，抱大腿球解答……
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xxx幽冥

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于taq酶的弱弱的问题，抱大腿球解答……

今天刚做完限选课实验，提取植物DNA，然后PCR，电泳全军覆没，没出DNA条带……做的时候，一堆人手忙脚乱往PCR管里加东西，老师说我们失败的原因是PCR管子在手里攥太久了，没放冰浴里面，taq酶比较娇气，失活了，但是好奇怪啊，它不是耐高温的么，怎么室温一会就失活了呢？
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1楼 2013-05-31 19:17:40
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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xxx幽冥(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 23:19:03
taq酶一点也不娇气，外面放几天都没事的，还在乎你手里攥会，我觉得这个不是失败的原因。
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2楼2013-05-31 19:38:55
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xxx幽冥(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 23:19:14
“一堆人手忙脚乱往PCR管里加东西”这才是原因吧。
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3楼2013-05-31 20:38:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xxx幽冥(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-01 14:59:28
taq酶不会这么容易失活。只是在任何温度下都有活性，不在冰上混样品容易有非特异扩增和引物二聚体。我觉得可能是体系里面什么东西忘记加或者加错了。
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4楼2013-06-01 04:39:15
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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你是不是引物 还是 模板 忘了加？

另外你有没有确定DNA提取成功？
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5楼2013-06-01 11:30:43
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xxx幽冥(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-01 14:59:38
那么多人，污染严重了吧。
反正这不是人多能办成的事。
我做的时候带手套，穿白大褂，带帽子，带口罩。
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6楼2013-06-01 14:15:50
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xxx幽冥(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-01 14:59:49
先看DNA电泳有没有条带，确定是否PCR没东西是否由模板造成。
Taq酶还好，我放4℃几个月都没事
人多可能加错样，这是主要的
也有可能是跑电泳出了问题
不能单纯说是Taq酶的问题，看来老师不专业呀
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
7楼2013-06-01 14:33:39
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泪花雨水

新虫 (初入文坛)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-03 18:22:53
手攥手里失活的可能性是非常小的，应该是PCR 反应体系加的时候有问题，人多手忙脚乱很容易少加或错加，不过还是建议以后最后加酶，这样加样过程中不用放冰上，也不必担心酶失活
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8楼2013-06-01 18:00:55
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xxx幽冥

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by q317476148 at 2013-06-01 14:15:50
那么多人，污染严重了吧。
反正这不是人多能办成的事。
我做的时候带手套，穿白大褂，带帽子，带口罩。

10个组，本科生实验你懂的
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9楼2013-06-01 18:41:34
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songzuowei

木虫 (著名写手)
这个PCR P不出来很正常的 影响因素太多了 把原因归结到Tag酶失活上就有点扯了
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10楼2013-06-01 18:48:06
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