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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于taq酶的弱弱的问题，抱大腿球解答……
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xxx幽冥

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-05-31 19:38:55
taq酶一点也不娇气，外面放几天都没事的，还在乎你手里攥会，我觉得这个不是失败的原因。

是呀……
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11楼2013-06-01 19:16:53
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xxx幽冥

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by alarace at 2013-05-31 20:38:15
“一堆人手忙脚乱往PCR管里加东西”这才是原因吧。

一群人轮流用那个冰浴盆里的试剂的，应该不至于所有人都加错了吧-。-
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12楼2013-06-01 19:18:11
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xxx幽冥

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-01 04:39:15
taq酶不会这么容易失活。只是在任何温度下都有活性，不在冰上混样品容易有非特异扩增和引物二聚体。我觉得可能是体系里面什么东西忘记加或者加错了。

引物二聚体倒是出现，有10个组在做，结果都没出来，不太可能所有组都加错或者漏加，taq酶又没有问题，难道是试剂的问题？
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13楼2013-06-01 19:20:29
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xxx幽冥

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by porphybaby at 2013-06-01 11:30:43
你是不是引物 还是 模板 忘了加？

另外你有没有确定DNA提取成功？

10个组呢~应该不至于每个组都忘加了啥吧囧 。 DNA提取成功了，70%乙醇洗涤，离心过后不小一块呢
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14楼2013-06-01 19:22:17
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xxx幽冥

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by 泪花雨水 at 2013-06-01 18:00:55
手攥手里失活的可能性是非常小的，应该是PCR 反应体系加的时候有问题，人多手忙脚乱很容易少加或错加，不过还是建议以后最后加酶，这样加样过程中不用放冰上，也不必担心酶失活

好的
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15楼2013-06-01 19:24:05
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脏井鹏

铜虫 (初入文坛)
跟我们班的情况惊人的相识啊!
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16楼2013-06-01 21:02:30
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-06-03 18:23:11
呵呵，这个问题原因很多啦！
怀疑加错了或者漏加了，可以重复实验！
不知道你们的引物啊，退火温度啊，之类是不是老师提前确定好的，要不然这个也可能是原因！
还可能你们在提模板的时候，模板质量不好！
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17楼2013-06-01 23:20:57
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by xxx幽冥 at 2013-06-01 19:20:29
引物二聚体倒是出现，有10个组在做，结果都没出来，不太可能所有组都加错或者漏加，taq酶又没有问题，难道是试剂的问题？...

出现引物二聚体说明体系里面有引物和taq酶，但浓度是否正确不得而知。如果是大家都有问题，很可能的共用的试剂出现问题了。
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18楼2013-06-01 23:28:13
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
这老师也挺扯了的
估计也是没做过实验的主儿，如果做过实验，怎么会给出这样的理由呢
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19楼2013-06-02 02:02:14
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冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by q317476148 at 2013-06-01 14:15:50
那么多人，污染严重了吧。
反正这不是人多能办成的事。
我做的时候带手套，穿白大褂，带帽子，带口罩。

你做PCR太严谨了啊。。。。不会那么容易污染的啊
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船到桥头自然直
20楼2013-06-03 13:15:00
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