应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » gateway体系连ENtry载体
51/1返回列表
查看: 2352  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

icanplay90

铜虫 (初入文坛)

[求助] gateway体系连ENtry载体

最近构建gateway体系的入门载体，体系是pcr产物2ul，vector0.5ul,盐溶液0.5ul。 之前用的时候，转化一次，虽然长的点不多，但一般都有阳性克隆。这次想连一个启动子加基因全长的片段，大约6900bp左右。反应的条件是22度30min。长了八个点，但是今天上午一鉴定，全是假阳性。。。这是为什么呀为什么？求指教问题出那了。。。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-05-31 18:31:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

icanplay90

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 18:57:21
BP反应的话，你想连上的基因比较大，可以考虑使用2微升基因DNA，1微升vector（两者浓度100 ng/ul以上），再加0.5微升酶混匀，另外，22度30min太短，最好室温过夜反应。

恩 我试一下 实验室管理的老师是个抠门 每次连ENTRY载体 就告诉我一个反应多贵多贵 总之 谢谢 等我试完了给您答复
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-31 20:41:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-31 18:59:27
BP反应的话，你想连上的基因比较大，可以考虑使用2微升基因DNA，1微升vector（两者浓度100 ng/ul以上），再加0.5微升酶混匀，另外，22度30min太短，最好室温过夜反应。
赞一下(1人) 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2013-05-31 18:57:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by icanplay90 at 2013-05-31 20:41:09
恩 我试一下 实验室管理的老师是个抠门 每次连ENTRY载体 就告诉我一个反应多贵多贵 总之 谢谢 等我试完了给您答复...

Good luck！
20次152镑，但每次反应只用0.5微升，可以用到70-80次
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2013-05-31 20:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

icanplay90

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 20:57:31
Good luck！
20次152镑，但每次反应只用0.5微升，可以用到70-80次...

试了一下 没连上 然后我用紫外分光光度计测了下浓度 没读出来
这样看来好像是我回收产物回融的时候弄得太稀了吧。 然后我就浓缩了一下 ，现在的浓度接近400ng/ul ，麻烦大虾帮忙算下体系。。。3Q！VECTOR和引物都按0.5ul算的话 还是能省则省吧 哎
我现在都不好意思要了 再这么下去 我都快用了一管了
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-05 21:07:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +7 困于星晨 2026-03-17 9/450 2026-03-20 17:38 by 无懈可击111
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭