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PCR引物问题
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求大神帮忙看一下我设计的这对引物可以用吗？ 正向CTAAGCCCCGTA Tm 39.22 GC含量 58.33％ 反向CGTGTCGCCTGC Tm48.86 GC含量75％ 个人担心问题是：一 引物长度12bp，是不是比较短啊？ 二 两个引物Tm值相差是不是比较大？ 三 反向引物GC含量是不是有点高啊？ |
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【答案】应助回帖
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左九年(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 02:01:30
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 02:01:34
左九年: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-29 19:35:15
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左九年: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-29 19:35:15
| 你这一对引物不是很好。引物一般是18-27个碱基，常用20个碱基；然后就是你的正向引物退火温度太低，一般在45-60度最好；你的上下游引物的Tm值相差比较大，最好相近；你的反向引物GC含量太大了，一般在45%-55%；此外，引物不应有发夹结构，即不能有4bp以上的回文序列；两引物间不应有大于4pb以上的互补序列或同源序列，在3’端不应有任何互补碱基。 |
11楼2013-05-28 22:49:39
kx444555
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2楼2013-05-27 10:29:52
3楼2013-05-27 10:54:12
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4楼2013-05-27 11:33:38