| 查看: 669 | 回复: 2 | ||
| 本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看 | ||
[求助]
诚心求助，关于芽孢杆菌感受态细胞的制备！！！！！
|
||
| 诚心求助，我要做一株萎缩芽孢杆菌的基因敲除，在电转之前需要做这株菌的感受态细胞，以前从来没有做过，是个实验菜鸟，诚心希望各位做过类似实验的给点建议或相关资料，最好说下具体步骤，和实验中需注意的细节，小妹感激不尽！！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
272求调剂
已经有3人回复
-
317一志愿华南理工电气工程求调剂
已经有5人回复
-
化工专硕348，一志愿985求调剂
已经有6人回复
-
292求调剂
已经有3人回复
-
304求调剂
已经有4人回复
-
290求调剂
已经有6人回复
-
295求调剂
已经有5人回复
-
26申博
已经有4人回复
-
材料学调剂
已经有5人回复
-
264求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大肠杆菌感受态细胞的制备
已经有10人回复
- 大肠杆菌电转感受态细胞的制备中遇到的问题
已经有8人回复
- 求助：毕氏酵母GS115感受态细胞的制备及转化方法
已经有5人回复
- 【求助】感受态细胞制备
已经有10人回复
- 【求助/交流】急求：高效制备大肠杆菌感受态细胞试剂盒的solutionA 和solutionB 的成�
已经有4人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌DH5α感受态细胞制备求助
已经有19人回复
- 【求助/交流】关于制备感受态细胞的重悬问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】求助：酵母感受态细胞的制备
已经有9人回复
- 【求助/交流】感受态细胞的制备
已经有18人回复
志子
至尊木虫 (文坛精英)
- MicEPI: 5
- 应助: 2847 (讲师)
- 贵宾: 0.743
- 金币: 42456.9
- 散金: 3857
- 红花: 299
- 帖子: 21362
- 在线: 1136.8小时
- 虫号: 2471022
- 注册: 2013-05-19
- 专业: 高分子组装与超分子结构
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: MicEPI+1, good！ 2013-05-28 20:35:05
laozuzunzhe: MicEPI+1, good！ 2013-05-28 20:35:05
|
芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化 1) 将菌种接种在LB平板上37 ℃培养过夜。 2) 用接种环接一环菌苔于5mL GM I 溶液，在30 ℃慢摇床（125 r/min）振荡培养过夜。 3) 次日取2 mL转接到18 mL GM I 中，37 ℃快摇床（250 r/min）培养3.5 h。 4) 再取10 mL上一步骤的培养液转接到90 mL GM II 中，37 ℃慢摇床培养90 min后5,000 g，10 min离心收集菌体。 5) 用10 mL原培养液上清液轻轻悬浮菌体，悬浮后的菌体即为感受态细胞可以直接用来转化。 6) 感受态细胞的保存：加30%的灭菌甘油至终浓度为10%，混匀后分装到离心管中（0.5 mL/tube），随即放到-70 ℃保存。 7) 转化时取出离心管，放在45 ℃水浴中溶化，然后在0.5 mL菌液中加入适量DNA（～1 ug/ml）。 8) 于37 ℃振荡（200 r/min）保温30 min后涂布相应抗性平板，再在37 ℃培养过夜，次日检查和验证转化子。 普通化学感受态细胞制备用试剂 [1] 10×最低盐溶液：K2HPO4 70 g，KH2PO4 30 g，（NH4）2SO4 10 g，（Na3C6H5O7•2H2O）5 g，MgSO4•7H2O 1 g，在蒸馏水中依次溶解，加水至500 mL。 [2] 氨基酸溶液（根据不同菌株的基因缺陷型准备）：10 mg/mL，贮于棕色瓶内，113℃灭菌30 min，用黑纸包裹。 [3] GM I溶液：1×最低盐溶液95.6 mL，20%葡萄糖2.5 mL，5%水解酪蛋白0.4 mL，10%酵母汁1 mL，10 mg/mL氨基酸溶液0.5 mL（50 μg/mL）。 [4] GM I溶液：1×最低盐溶液96.98 mL，20%葡萄糖2.5 mL，5%水解酪蛋白0.08 mL，10%酵母汁0.04 mL，1 M MgCl2 0.25 mL（2.5 mM），1 M CaCl2 0.05 mL（0.5 mM），10 mg/mL氨基酸溶液0.1 mL（5 μg/mL）。 |
2楼2013-05-26 02:02:46
3楼2013-05-26 17:45:37
