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madrid75木虫 (小有名气)
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关于葡萄糖生成实验
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最近在做HepG2细胞的葡萄糖生成实验（glucose production/output assay）。实验步骤是，细胞以1.5*10E6接入6孔板，使用含地塞米松（500nM）和Bt2-cAMP（100uM）的无血清MEM培养基处理5小时，再换用含20mM乳酸钠，2mM丙酮酸钠和15mM Hepes的DMEM（不含糖和酚红）培养基处理3小时。最后用sigma的葡萄糖氧化法试剂盒检查培养基中的糖浓度。结果是不能检查到葡萄糖。不知道问题出在什么地方，请大家指点！ 另外，我也试过刺激（地塞米松等）时间延长到24小时，再换生糖培养基（处理3-6小时），或不使用药物刺激直接换生糖培养基处理3-6小时，结果也都是检查不到葡萄糖。 |
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