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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于葡萄糖生成实验
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madrid75

木虫 (小有名气)

[求助] 关于葡萄糖生成实验

最近在做HepG2细胞的葡萄糖生成实验（glucose production/output assay）。实验步骤是，细胞以1.5*10E6接入6孔板，使用含地塞米松（500nM）和Bt2-cAMP（100uM）的无血清MEM培养基处理5小时，再换用含20mM乳酸钠，2mM丙酮酸钠和15mM Hepes的DMEM（不含糖和酚红）培养基处理3小时。最后用sigma的葡萄糖氧化法试剂盒检查培养基中的糖浓度。结果是不能检查到葡萄糖。不知道问题出在什么地方，请大家指点！

另外，我也试过刺激（地塞米松等）时间延长到24小时，再换生糖培养基（处理3-6小时），或不使用药物刺激直接换生糖培养基处理3-6小时，结果也都是检查不到葡萄糖。
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1楼 2013-05-24 16:55:00
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dongxie1982

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-05-27 08:38:26
madrid75: 金币+5, ★有帮助, 再具体点就好了。 2013-07-01 07:49:36
lz可以考虑下是不是溶度不在检测线性范围内？延长生存时间或提高细胞溶度、刺激作用溶度时间！
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2楼2013-05-26 10:09:55
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madrid75

木虫 (小有名气)
★
silicare: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-05-27 10:43:44
引用回帖:
2楼: Originally posted by dongxie1982 at 2013-05-26 10:09:55
lz可以考虑下是不是溶度不在检测线性范围内？延长生存时间或提高细胞溶度、刺激作用溶度时间！

细胞密度试过2*10E6（六孔板）、3*10E5（二十四孔板），贴壁后能铺满90%以上。
刺激时间（MEM有糖培养基加地塞米松等）最长做过24小时，生糖时间（DMEM无糖培养基加乳酸等底物）最长做过6小时，都是我看过的文献中作用时间最长的了。再延长作用时间，肝细胞本身会不会也消耗生成的葡萄糖？请问您用的作用条件是怎样的？
我用的试剂检查下限是2 mg/dl (0.11 mM)，sigma的，不知您用的是哪种试剂？
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3楼2013-05-27 10:37:17
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