8楼: Originally posted by Renavatio at 2013-05-23 22:44:22
amp平板上长是因为pMD18-T细菌中抗性就是ampR.你所扩增的NEO表达框中启动子为真核生物的启动子，在大肠杆菌中是不会启动下游基因的表达，故不会表达NEO/kana抗性

9楼: Originally posted by 547star at 2013-05-23 23:04:29
看了载体图谱,有两个启动子控制卡那抗性基因的,所以整个质粒在大肠杆菌和真核细胞都有抗性,至于你克隆的,不知道包括到哪些启动子序列,如果没有原核生物中起作用的启动子,估计就没有表达抗性基因了,或者你降低抗生素 ...

10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-23 23:26:10
你再检查一下克隆的序列是否包括了原核的启动子。如果你要做的敲除实验是在真核生物里面，只需要包括真核的启动子就可以了。...

13楼: Originally posted by zd0017 at 2013-05-24 10:16:32
谢谢指教，重新看了下克隆的序列，真的没有包括原核启动子，我要做的敲除是在原核生物里面，估计要重新做了。...

12楼: Originally posted by zd0017 at 2013-05-24 10:12:30
谢谢指教，看了下我克隆的序列，的确没有吧原核生物起作用的启动子ampR promoter 给克隆下来，之前完全没有看到想到这一层，学习啦
还想问一下，载体pMD18-t中也有ampR promoter 这个启动子，如果我是正向插入的话 ...

16楼: Originally posted by Renavatio at 2013-05-24 23:35:55
建议找个含有Kan抗性的原核表达载体  扩增其Kan抗性基因比较方便

8楼: Originally posted by Renavatio at 2013-05-23 22:44:22
amp平板上长是因为pMD18-T细菌中抗性就是ampR.你所扩增的NEO表达框中启动子为真核生物的启动子，在大肠杆菌中是不会启动下游基因的表达，故不会表达NEO/kana抗性