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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么扩了一个抗性基因，连到载体上，这个基因没有表达呢，跪求各个大牛指导！！！
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zd0017

铁虫 (小有名气)

[求助] 为什么扩了一个抗性基因，连到载体上，这个基因没有表达呢，跪求各个大牛指导！！！

最近从载体pEGFP-C3上扩neo基因，再连到pMD18-T载体上，但没有neo抗性，请大牛指导下哪里出了问题，经测序，没有突变！！！小菜一枚在这里先谢谢各位牛人啦！！！
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1楼 2013-05-22 20:19:06
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whatsao

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Renavatio at 2013-05-23 22:44:22
amp平板上长是因为pMD18-T细菌中抗性就是ampR.你所扩增的NEO表达框中启动子为真核生物的启动子，在大肠杆菌中是不会启动下游基因的表达，故不会表达NEO/kana抗性

其实，楼主将基因插在了MCS中，而MCS在乳糖启动子之下，按理说是可以转录的。
但要注意的一点是虽然乳糖启动子可以转录，但插入的序列在MCS中，而不是紧挨着启动子的，即可能会乱码，毕竟不一定是3个碱基的整数。
所以，就算转录了，也可能是乱码，故表现不出看阿霉素的抗性。
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18楼2017-04-06 19:20:56
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-22 21:58:12
pEGFP-C3是个真核表达载体，pMD18-T是个原核载体吧？真核和原核的表达调控元件是完全不同的。
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2楼2013-05-22 21:16:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zd0017(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-24 03:08:50
gyesang: 回帖置顶 2013-05-24 03:08:58
新霉素抗性基因是真核表达载体的一种筛选marker，neo基因编码新霉素磷酸转移酶，通过对G418、新霉素和卡那霉素磷酸化来降解抗生素儿实验抗性的。在原核生物宿主里应该用卡那霉素筛选。
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3楼2013-05-23 02:45:49
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zd0017

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-23 02:45:49
新霉素抗性基因是真核表达载体的一种筛选marker，neo基因编码新霉素磷酸转移酶，通过对G418、新霉素和卡那霉素磷酸化来降解抗生素儿实验抗性的。在原核生物宿主里应该用卡那霉素筛选。

谢谢你的回复，也用了kana抗性的筛了，也没克隆长出啊，不知道什么原因啊
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4楼2013-05-23 11:22:41
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