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幻雪水晶

木虫 (小有名气)

[求助] 关于EDC/NHS 反应

请教做过EDC、NHS反应的同学,在羧基修饰的纳米微球上修饰蛋白,以10mg/ml 的EDC和10mg/ml NHS来活化羧基1 h,pH5.0,然后在pH7.2左右加入蛋白,37摄氏度恒温培养2h,但偶联效果一直不太好,请问各位,我的实验过程有什么问题,或者大家有什么好的建议,请帮忙提一下,不胜感激啊
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幻雪水晶

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ethmit1 at 2013-05-18 00:45:18
对了,不用活化1个小时,混在一起同时进行即可。我做的EDC/Sulfo-NHS反应还比较成功

意思是直接将EDC/NHS还有蛋白一起溶解在PBS中然后室温反应12h吗?刚开始做这个实验,很多地方不懂,还请多多指教啊
5楼2013-05-18 17:52:56
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aircraftvip

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
红舟流星: 金币+1, 专家考核, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-05-18 00:29:24
幻雪水晶: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-05-18 17:50:25
1. EDC反应的最佳条件是pH 4.5 (或者在4-6范围之间),中性条件下效率大大降低。
2.反应时间2h太短了,延长到12h会好很多。
3. 室温足够了。
4.反应完应考虑用透析或柱子把小分子量的脲除掉。
good luck!
格物致知,知行合一
2楼2013-05-17 22:48:33
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ethmit1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
幻雪水晶: 金币+10 2013-05-18 17:53:12
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2013-05-18 20:40:30
楼主可以试试在PBS (pH=7.4, 0.01M)的条件下进行。EDC与Sulfo-NHS的摩尔量比10:1,室温下反应10个小时以上应该足够。EDC在水相会分解的,Sulfo-NHS起稳定作用,所以EDC要过量。你先试试啊,然后再跟我说下管用不。
3楼2013-05-18 00:43:31
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ethmit1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2013-05-18 20:40:50
对了,不用活化1个小时,混在一起同时进行即可。我做的EDC/Sulfo-NHS反应还比较成功
4楼2013-05-18 00:45:18
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