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woerjianbo木虫 (小有名气)
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MTT实验吸收波长和吸光值范围是多少
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看了一些文献，酶标仪检测波长490nm、570nm，有什么区别，还有说是六百多nm的，到底用哪个？ 最终测定的吸光值范围是多少，有说0-0.7的，还有0.7-1.25，1-2的，到底是哪个线性区间比较好，或者说在什么条件下选择不同的吸光范围？ 谢谢 |
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【答案】应助回帖
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woerjianbo: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-01 13:04:51
woerjianbo: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-01 13:04:51
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楼主是用MTT做实验检测细胞活性，一般是读两个波长，490nm,570nm;490nm是测信号的，570nm测背景值，最后的数据是用OD490-OD570的结果。 先给楼主介绍一下吸光值的概念，假如仪器给出一个光强为A的特定波长的光，透过检测液体后，侦测到的该特定波长的光的强度为B，吸光值OD=log(A/B),吸光值为0，A=B代表检测液体无吸收；吸光值为1，代表A/B=10,仪器发出的光有90%被检测液吸收。读OD的实验的灵敏度一般都不太好，OD值最大也就3，也就是10的3次方的灵敏度，不如 fluorescence（10七次方）灵敏。 至于吸光值的范围，这跟细胞的量有关，细胞的量越多，OD值越大，建议楼主做个梯度稀释实验，验证一下细胞的多少，在哪个范围内OD值处于线性范围。 |
2楼2013-05-31 20:32:24