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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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woerjianbo

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[求助] MTT实验吸收波长和吸光值范围是多少

看了一些文献,酶标仪检测波长490nm、570nm,有什么区别,还有说是六百多nm的,到底用哪个?
最终测定的吸光值范围是多少,有说0-0.7的,还有0.7-1.25,1-2的,到底是哪个线性区间比较好,或者说在什么条件下选择不同的吸光范围?
谢谢
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yyy0305

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
woerjianbo: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-01 13:04:51
楼主是用MTT做实验检测细胞活性,一般是读两个波长,490nm,570nm;490nm是测信号的,570nm测背景值,最后的数据是用OD490-OD570的结果。
      先给楼主介绍一下吸光值的概念,假如仪器给出一个光强为A的特定波长的光,透过检测液体后,侦测到的该特定波长的光的强度为B,吸光值OD=log(A/B),吸光值为0,A=B代表检测液体无吸收;吸光值为1,代表A/B=10,仪器发出的光有90%被检测液吸收。读OD的实验的灵敏度一般都不太好,OD值最大也就3,也就是10的3次方的灵敏度,不如 fluorescence(10七次方)灵敏。
     至于吸光值的范围,这跟细胞的量有关,细胞的量越多,OD值越大,建议楼主做个梯度稀释实验,验证一下细胞的多少,在哪个范围内OD值处于线性范围。
2楼2013-05-31 20:32:24
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