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bianyu

铜虫 (正式写手)

[求助] 如何确定不同藻液吸收值的测定波长，比如螺旋藻文献报道在560nm处测定OD？

请教，微藻培养过程中，一般采用测定OD值来换算生物量，那么如何确定某种微藻的测定波长呢？
去文献中找比较常用的方法，但是我养的几种微藻没有找到相关文献，所以打算用波谱扫描后选取最大吸收峰的波长，我之前曾对几个样品扫描，但是很迷惑的是：
测定的螺旋藻在680nm处有吸收峰，在500nm到350nm是升高的趋势，那怎么文献中选择560nm为测定波长呢，选择依据是？
求解！先行谢过！
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1楼 2013-01-06 11:26:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 谢谢热心交流 2013-01-06 14:19:13
bianyu: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢，这是针对螺旋藻，那针对其他藻呢？ 2013-01-06 15:56:56
用吸光度换算生物量本身就不是很科学的办法。但是这个指标很容易测，所以大家都用。但只是一个大致的衡量。680的吸收峰是叶绿素a的红区吸收。350-500nm包括很多吸收，主要有叶绿素的蓝区吸收，还有各类胡萝卜素的吸收。用560nm做吸收主要是几种藻胆蛋白色素的吸收。因为藻胆体是蓝藻的主要天线蛋白，其色素的含量往往可以衡量蓝藻的生长状况。但是，在不同的光照、营养条件下，藻胆色素的含量是有差别的，所以不能完全用太来衡量生物量。
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bianyu
2楼2013-01-06 14:07:34
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bianyu

铜虫 (正式写手)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-06 14:07:34
用吸光度换算生物量本身就不是很科学的办法。但是这个指标很容易测，所以大家都用。但只是一个大致的衡量。680的吸收峰是叶绿素a的红区吸收。350-500nm包括很多吸收，主要有叶绿素的蓝区吸收，还有各类胡萝卜素的吸 ...

哦原来这样，那用什么方法计算微藻生物量比较好呢，我查了些资料，吸光度值的方法比较常用，细胞计数的方法也有用但是比较繁琐、而且当微藻生长到一定阶段会抱团，数起细胞来误差也比较大呢。请问你们在做的主要采用哪种方法呢？谢谢了！
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3楼2013-01-06 15:56:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bianyu at 2013-01-06 15:56:23
哦原来这样，那用什么方法计算微藻生物量比较好呢，我查了些资料，吸光度值的方法比较常用，细胞计数的方法也有用但是比较繁琐、而且当微藻生长到一定阶段会抱团，数起细胞来误差也比较大呢。请问你们在做的主要采 ...

粗略的一般的话就用OD，因为简便。数细胞是很繁琐。尤其是丝状藻，样品均一性差。如果想比较精确的话可以用干重表示。
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bianyu
4楼2013-01-06 16:06:47
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bianyu

铜虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-06 16:06:47
粗略的一般的话就用OD，因为简便。数细胞是很繁琐。尤其是丝状藻，样品均一性差。如果想比较精确的话可以用干重表示。...

哦，谢谢了！
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5楼2013-01-10 13:35:40
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quiller2000

木虫 (著名写手)
呵呵，2楼也是做藻的啊~
一般而言，通过OD来评估细胞数，如果没有同行公认的标准，则自己要做一些基础工作：将菌液梯度稀释，然后每个稀释度做全波长扫描；根据扫描的结果，对应于稀释度（最好有平板计数），看看你打算选择的OD值和细胞数是否对应；
有的时候，细胞特征吸收峰往往和其生理状态有关，如蓝细菌的435,515，630,680等，这样的位置最好不要选，他们难以用于评价细胞量。

当然，选择如750，可能能够评价细胞量，但是难以区分活细胞或者死细胞，看你的工作需要。
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致良知
6楼2013-01-10 22:58:26
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