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bianyu

铜虫 (正式写手)

[求助] 如何确定不同藻液吸收值的测定波长,比如螺旋藻文献报道在560nm处测定OD?

请教,微藻培养过程中,一般采用测定OD值来换算生物量,那么如何确定某种微藻的测定波长呢?
去文献中找比较常用的方法,但是我养的几种微藻没有找到相关文献,所以打算用波谱扫描后选取最大吸收峰的波长,我之前曾对几个样品扫描,但是很迷惑的是:
测定的螺旋藻在680nm处有吸收峰,在500nm到350nm是升高的趋势,那怎么文献中选择560nm为测定波长呢,选择依据是?
求解!先行谢过!
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quiller2000

木虫 (著名写手)

呵呵,2楼也是做藻的啊~
一般而言,通过OD来评估细胞数,如果没有同行公认的标准,则自己要做一些基础工作:将菌液梯度稀释,然后每个稀释度做全波长扫描;根据扫描的结果,对应于稀释度(最好有平板计数),看看你打算选择的OD值和细胞数是否对应;
有的时候,细胞特征吸收峰往往和其生理状态有关,如蓝细菌的435,515,630,680等,这样的位置最好不要选,他们难以用于评价细胞量。

当然,选择如750,可能能够评价细胞量,但是难以区分活细胞或者死细胞,看你的工作需要。
致良知
6楼2013-01-10 22:58:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 谢谢热心交流 2013-01-06 14:19:13
bianyu: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢,这是针对螺旋藻,那针对其他藻呢? 2013-01-06 15:56:56
用吸光度换算生物量本身就不是很科学的办法。但是这个指标很容易测,所以大家都用。但只是一个大致的衡量。680的吸收峰是叶绿素a的红区吸收。350-500nm包括很多吸收,主要有叶绿素的蓝区吸收,还有各类胡萝卜素的吸收。用560nm做吸收主要是几种藻胆蛋白色素的吸收。因为藻胆体是蓝藻的主要天线蛋白,其色素的含量往往可以衡量蓝藻的生长状况。但是,在不同的光照、营养条件下,藻胆色素的含量是有差别的,所以不能完全用太来衡量生物量。

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2楼2013-01-06 14:07:34
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bianyu

铜虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-06 14:07:34
用吸光度换算生物量本身就不是很科学的办法。但是这个指标很容易测,所以大家都用。但只是一个大致的衡量。680的吸收峰是叶绿素a的红区吸收。350-500nm包括很多吸收,主要有叶绿素的蓝区吸收,还有各类胡萝卜素的吸 ...

哦原来这样,那用什么方法计算微藻生物量比较好呢,我查了些资料,吸光度值的方法比较常用,细胞计数的方法也有用但是比较繁琐、而且当微藻生长到一定阶段会抱团,数起细胞来误差也比较大呢。请问你们在做的主要采用哪种方法呢?谢谢了!
3楼2013-01-06 15:56:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bianyu at 2013-01-06 15:56:23
哦原来这样,那用什么方法计算微藻生物量比较好呢,我查了些资料,吸光度值的方法比较常用,细胞计数的方法也有用但是比较繁琐、而且当微藻生长到一定阶段会抱团,数起细胞来误差也比较大呢。请问你们在做的主要采 ...

粗略的一般的话就用OD,因为简便。数细胞是很繁琐。尤其是丝状藻,样品均一性差。如果想比较精确的话可以用干重表示。

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4楼2013-01-06 16:06:47
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