应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 蛋白纯化
51/1返回列表
查看: 884  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

stone0989

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化

近来纯化蛋白，深受打击。将目的基因转入载体pET-21b后，在宿主细胞BL21中进行原核表达。经过诱导后收集菌体，超声波破碎，目的蛋白在上清中有一定的表达量，但沉淀中也存在（我认为超声破碎不完全）。采用BBI家的Ni-NTA预装柱进行纯化，pH8.0 0-500mM的咪唑溶液进行梯度洗脱，杂蛋白与目的蛋白均在100mM时被洗脱下来，是为什么呢？？？求助！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-05-16 09:05:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定是杂蛋白吗？一般his-tag的蛋白用100-200mM的咪唑应该可以洗下来的。如果是杂蛋白，一般会在咪唑浓度更低时洗脱下来。你可以在elute前多洗洗柱子。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-16 12:25:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianshengguo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这在我们做蛋白纯化中是很常见的，我们通常会采用离子柱、凝胶过滤或优化梯度来实现
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-17 10:45:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你们那可以做wb吗？建议鉴定一下，100洗下来的是不是降解带。若不可以的话，建议，上清加100mm咪唑，孵育一小时，知道怎么孵育吗？就是扣点散装镍柱，放到上清理，用搅拌子搅拌，或者放在50ml离心管中，在转盘上转，或者，放烧杯里，放要床上摇。一个小时可以了。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-17 12:17:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

亲，你有洗杂吗？有杂带50mm咪唑都洗不下来的。或者用biorad公司的镍柱，特异性非常好，不挂杂带，有杂带就是降解带了。
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-17 12:20:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 stone0989 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭