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[求助]
蛋白纯化
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| 近来纯化蛋白，深受打击。将目的基因转入载体pET-21b后，在宿主细胞BL21中进行原核表达。经过诱导后收集菌体，超声波破碎，目的蛋白在上清中有一定的表达量，但沉淀中也存在（我认为超声破碎不完全）。采用BBI家的Ni-NTA预装柱进行纯化，pH8.0 0-500mM的咪唑溶液进行梯度洗脱，杂蛋白与目的蛋白均在100mM时被洗脱下来，是为什么呢？？？求助！！！ |
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