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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DGGE 条带模糊 无法分离
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lulufantasy

新虫 (小有名气)

[求助] DGGE 条带模糊 无法分离

刚开始做PCR-DGGE。采用OMega试剂盒提取土壤DNA，做PCR后，开始DGGE，条件如下：梯度40-70%，电压160V，跑胶4个半小时，EB染色15min，照相
第一张图为DGGE，左边三个样品较模糊，无法分离
求解答！

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1楼 2013-05-15 21:23:25
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-05-17 08:03:59
胶没有跑开。
看你的图，160V至少得需要5个半小时条带才能跑到下面来。
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2楼2013-05-16 09:44:00
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-05-17 08:03:34
你的PCR产物大概是多大?应该是时间短了，我一般都跑180V,5h的
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但行好事，莫问前程
3楼2013-05-16 15:16:55
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先电压高了，条带有月牙状的，将低电压，延长泳动时间。
第二，变形梯度不对，50%以下无条带，增加低浓度的变性梯度。建议试试30-50%。
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一路蚯蚓
4楼2013-05-19 15:40:14
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lulufantasy

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-05-16 09:44:00
胶没有跑开。
看你的图，160V至少得需要5个半小时条带才能跑到下面来。

但是看胶的话，染色带已经跑到了最低端，这是怎么回事呢
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5楼2013-05-22 09:47:05
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lulufantasy

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 20093651 at 2013-05-16 15:16:55
你的PCR产物大概是多大?应该是时间短了，我一般都跑180V,5h的

200bp的，胶上的染色条带已经跑到了底端，怎么回事呢
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6楼2013-05-22 09:47:44
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lulufantasy

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huangk1199 at 2013-05-19 15:40:14
首先电压高了，条带有月牙状的，将低电压，延长泳动时间。
第二，变形梯度不对，50%以下无条带，增加低浓度的变性梯度。建议试试30-50%。

不好意思，我是菜鸟，问个菜鸟问题：这个胶的梯度是如何分布的呢
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7楼2013-05-22 09:49:22
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by lulufantasy at 2013-05-22 09:49:22
不好意思，我是菜鸟，问个菜鸟问题：这个胶的梯度是如何分布的呢...

但是看胶的话，染色带已经跑到了最低端，这是怎么回事呢？
因为先到底端的是溴酚蓝，DNA 结合着甘油在中间没有跑下来。

不好意思，我是菜鸟，问个菜鸟问题：这个胶的梯度是如何分布的呢？
楼主追加金币呀
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一路蚯蚓
8楼2013-05-22 13:30:14
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