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lulufantasy

新虫 (小有名气)

[求助] DGGE 条带模糊 无法分离

刚开始做PCR-DGGE。采用OMega试剂盒提取土壤DNA,做PCR后,开始DGGE,条件如下:梯度40-70%,电压160V,跑胶4个半小时,EB染色15min,照相
第一张图为DGGE,左边三个样品较模糊,无法分离
求解答!

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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-05-17 08:03:59
胶没有跑开。
看你的图,160V至少得需要5个半小时条带才能跑到下面来。
2楼2013-05-16 09:44:00
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-05-17 08:03:34
你的PCR产物大概是多大?应该是时间短了,我一般都跑180V,5h的
但行好事,莫问前程
3楼2013-05-16 15:16:55
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先电压高了,条带有月牙状的,将低电压,延长泳动时间。
第二,变形梯度不对,50%以下无条带,增加低浓度的变性梯度。建议试试30-50%。
一路蚯蚓
4楼2013-05-19 15:40:14
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lulufantasy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-05-16 09:44:00
胶没有跑开。
看你的图,160V至少得需要5个半小时条带才能跑到下面来。

但是看胶的话,染色带已经跑到了最低端,这是怎么回事呢
5楼2013-05-22 09:47:05
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lulufantasy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 20093651 at 2013-05-16 15:16:55
你的PCR产物大概是多大?应该是时间短了,我一般都跑180V,5h的

200bp的,胶上的染色条带已经跑到了底端,怎么回事呢
6楼2013-05-22 09:47:44
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lulufantasy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by huangk1199 at 2013-05-19 15:40:14
首先电压高了,条带有月牙状的,将低电压,延长泳动时间。
第二,变形梯度不对,50%以下无条带,增加低浓度的变性梯度。建议试试30-50%。

不好意思,我是菜鸟,问个菜鸟问题:这个胶的梯度是如何分布的呢
7楼2013-05-22 09:49:22
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by lulufantasy at 2013-05-22 09:49:22
不好意思,我是菜鸟,问个菜鸟问题:这个胶的梯度是如何分布的呢...

但是看胶的话,染色带已经跑到了最低端,这是怎么回事呢?
因为先到底端的是溴酚蓝,DNA 结合着甘油在中间没有跑下来。

不好意思,我是菜鸟,问个菜鸟问题:这个胶的梯度是如何分布的呢?
楼主追加金币呀
一路蚯蚓
8楼2013-05-22 13:30:14
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