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20083630zhan

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒转化

最近几天一直在做转化,第一天下午涂板,第二天晚上10点多才能长出来,用牙签挑取单菌落,菌P,然后把牙签在盛有LB+AMP的液体培养基的1.5mlEP管中涮一下,37°培养,菌P显示有目的条带,然后把对应的EP管中的菌液加入到培养瓶中(LB+AMP)培养,菌体长得很慢,并且,再次提取质粒酶切,没有目的条带,不知道什么原因,请各位大神指教啊
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
24楼: Originally posted by nemo88 at 2013-05-18 00:18:28
调一下AMP浓度
我前几天也是这个问题 后来AMP调到150ug/ml  现在长出来的都是阳性克隆

不同的菌,AMP的浓度应该不一样吧
26楼2013-05-19 08:59:51
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
20083630zhan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-15 18:04:29
多半是污染, 楼主用PCR检查一下摇出来的菌液.
至于为什么头一天可以做出PCR, 我猜原因是你用的引物P出了残留在LB板上的模板.

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-05-15 16:51:06
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
20083630zhan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-15 18:04:35
你这多半是连接产物没有连接成功,是些空载体
把你的载体和PCR产物酶切回收后的样品跑个凝胶看看,质量好的话在重新连接转化
生物化学与分子生物学
3楼2013-05-15 17:34:44
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lidonghong at 2013-05-15 17:34:44
你这多半是连接产物没有连接成功,是些空载体
把你的载体和PCR产物酶切回收后的样品跑个凝胶看看,质量好的话在重新连接转化

但是我菌P的时候为什么会有我的目的条带啊?
4楼2013-05-15 20:53:33
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