24小时热门版块排行榜    

查看: 1735  |  回复: 25
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

20083630zhan

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒转化

最近几天一直在做转化,第一天下午涂板,第二天晚上10点多才能长出来,用牙签挑取单菌落,菌P,然后把牙签在盛有LB+AMP的液体培养基的1.5mlEP管中涮一下,37°培养,菌P显示有目的条带,然后把对应的EP管中的菌液加入到培养瓶中(LB+AMP)培养,菌体长得很慢,并且,再次提取质粒酶切,没有目的条带,不知道什么原因,请各位大神指教啊
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20083630zhan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-16 16:06:50
Amp 在50%乙醇中配置母液,过滤除菌,-20度保存,使用时按1:1000加入灭菌后降温培养基中。倒好的平板4度保存,使用时不超过14小时。...

AMP不用乙醇配置吧
16楼2013-05-16 20:06:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 26 个回答

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
20083630zhan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-15 18:04:29
多半是污染, 楼主用PCR检查一下摇出来的菌液.
至于为什么头一天可以做出PCR, 我猜原因是你用的引物P出了残留在LB板上的模板.

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-05-15 16:51:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
20083630zhan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-15 18:04:35
你这多半是连接产物没有连接成功,是些空载体
把你的载体和PCR产物酶切回收后的样品跑个凝胶看看,质量好的话在重新连接转化
生物化学与分子生物学
3楼2013-05-15 17:34:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20083630zhan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lidonghong at 2013-05-15 17:34:44
你这多半是连接产物没有连接成功,是些空载体
把你的载体和PCR产物酶切回收后的样品跑个凝胶看看,质量好的话在重新连接转化

但是我菌P的时候为什么会有我的目的条带啊?
4楼2013-05-15 20:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:40 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
信息提示
请填处理意见