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liuxiaotian

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质的同步荧光光谱

20个金币就是我的全部身家性命,渣研究生一个,刚使用小木虫,拜托了各位。
蛋白质的同步荧光光谱分析,使用的是日本的岛津5301.
在设置实验条件时,激发波长=295nm(样品是蛋白),发射波长是个范围,△ λ=60nm,发射波长=295+60nm~500nm,这样的设置没错吧?
但是文献中蛋白的峰的位置应该在300nm以内,,求问各大神这是什么情况啊。貌似设置没问题,那扫描就从355nm开始,出不了峰啊


附件中就是一个蛋白的同步荧光,是我哪个地方出问题了没?

未命名.jpg
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科学的事

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
按照图中曲线来看,BSA的荧光峰应该在310nm~330nm差不多,按照你的设置来说激发是从295nm开始扫的,间隔是60nm,那么对应的发射波长第一个点就是355nm了,这样的话你的扫描的范围应经不包括那个峰了。建议将激发波长设置为200nm~600nm(范围大点可选择的余地就大),那么对应的发射波长的范围是260nm~660nm这样才能包含发射峰。这样的话在不同的猝灭剂下强度才会发生变化,峰位才会出现移动,才能说明基团周围微环境的改变。
A-little-bit-more
2楼2013-05-15 13:11:22
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wymm1989

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学的事 at 2013-05-15 13:11:22
按照图中曲线来看,BSA的荧光峰应该在310nm~330nm差不多,按照你的设置来说激发是从295nm开始扫的,间隔是60nm,那么对应的发射波长第一个点就是355nm了,这样的话你的扫描的范围应经不包括那个峰了。建议将激发波长 ...

谢谢,我之前测出来我的蛋白的最大激发波长是在295nm的,那我不需要在同步荧光的激发波长也设置在295nm么?是不是同步荧光的激发波长设置上都是这样子的,保证发射峰出现的范围就可以了?
或者是这个意思,同步中的激发波长的设置值其实也只是一个范围的起点?
原谅我放荡一生笑点低
3楼2013-05-15 13:19:25
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科学的事

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wymm1989 at 2013-05-15 13:19:25
谢谢,我之前测出来我的蛋白的最大激发波长是在295nm的,那我不需要在同步荧光的激发波长也设置在295nm么?是不是同步荧光的激发波长设置上都是这样子的,保证发射峰出现的范围就可以了?
或者是这个意思,同步中 ...

它是一个范围,你要理解同步的意思,就拿最上面的两张图来说,对a,他的激发范围是250nm~315nm(差不多)间隔是60nm。对b来说,他的激发范围是260nm~320nm。在同步中不需要设置什么最大激发波长,他设置大是一个范围,如果要是固定激发波长那就是激发谱了。在同步谱中每一个强度点对应一组激发波长和发射波长。
A-little-bit-more
4楼2013-05-15 13:30:14
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ラン猫七

新虫 (初入文坛)

这个和拉曼光谱有什么关系嘛

发自小木虫IOS客户端
5楼2018-07-25 19:32:10
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