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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 蛋白质的同步荧光光谱
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liuxiaotian

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质的同步荧光光谱

20个金币就是我的全部身家性命，渣研究生一个，刚使用小木虫，拜托了各位。
蛋白质的同步荧光光谱分析，使用的是日本的岛津5301.
在设置实验条件时，激发波长=295nm（样品是蛋白）,发射波长是个范围，△ λ=60nm，发射波长=295+60nm~500nm,这样的设置没错吧？
但是文献中蛋白的峰的位置应该在300nm以内，，求问各大神这是什么情况啊。貌似设置没问题，那扫描就从355nm开始，出不了峰啊


附件中就是一个蛋白的同步荧光，是我哪个地方出问题了没？

未命名.jpg
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1楼 2013-05-14 16:57:32
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科学的事

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按照图中曲线来看，BSA的荧光峰应该在310nm~330nm差不多，按照你的设置来说激发是从295nm开始扫的，间隔是60nm，那么对应的发射波长第一个点就是355nm了，这样的话你的扫描的范围应经不包括那个峰了。建议将激发波长设置为200nm~600nm（范围大点可选择的余地就大），那么对应的发射波长的范围是260nm~660nm这样才能包含发射峰。这样的话在不同的猝灭剂下强度才会发生变化，峰位才会出现移动，才能说明基团周围微环境的改变。
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A-little-bit-more
2楼2013-05-15 13:11:22
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wymm1989

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学的事 at 2013-05-15 13:11:22
按照图中曲线来看，BSA的荧光峰应该在310nm~330nm差不多，按照你的设置来说激发是从295nm开始扫的，间隔是60nm，那么对应的发射波长第一个点就是355nm了，这样的话你的扫描的范围应经不包括那个峰了。建议将激发波长 ...

谢谢，我之前测出来我的蛋白的最大激发波长是在295nm的，那我不需要在同步荧光的激发波长也设置在295nm么？是不是同步荧光的激发波长设置上都是这样子的，保证发射峰出现的范围就可以了？
或者是这个意思，同步中的激发波长的设置值其实也只是一个范围的起点？
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原谅我放荡一生笑点低
3楼2013-05-15 13:19:25
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科学的事

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wymm1989 at 2013-05-15 13:19:25
谢谢，我之前测出来我的蛋白的最大激发波长是在295nm的，那我不需要在同步荧光的激发波长也设置在295nm么？是不是同步荧光的激发波长设置上都是这样子的，保证发射峰出现的范围就可以了？
或者是这个意思，同步中 ...

它是一个范围，你要理解同步的意思，就拿最上面的两张图来说，对a，他的激发范围是250nm~315nm（差不多）间隔是60nm。对b来说，他的激发范围是260nm~320nm。在同步中不需要设置什么最大激发波长，他设置大是一个范围，如果要是固定激发波长那就是激发谱了。在同步谱中每一个强度点对应一组激发波长和发射波长。
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A-little-bit-more
4楼2013-05-15 13:30:14
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ラン猫七

新虫 (初入文坛)
这个和拉曼光谱有什么关系嘛

发自小木虫IOS客户端
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5楼2018-07-25 19:32:10
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