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lyaikele管理员
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TD-PCR做出来条带很多怎么办，求高人指点
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本人新手，做微藻多样性的，最近开始做PCR，跟着一篇文献里的方法做。 文献里用的是TD-PCR，程序是这样说的“10 cycles of 94° for 15s，60 to 51° for 30s，72°for 2min。Followed by 25 cycles of 94° 15s，55°for 30 to 54s and 72° for 2min and final extension of 72° 7min”，如果我没理解错的话这句话的意思是前10个循环退火温度从60逐渐降到51，每个循环降1°，后25个循环退火温度为55°，但时间从30s逐渐增加到54s，每循环增加1s。 可是P出来的结果有很多条带，目的片段为1070bp，而跑胶跑出来有2000bp左右的，有1000bp左右的，还有900多bp左右的，而且那个1000多bp的跑出来也不齐，想请教前辈们有没有碰到过这种情况的，如何解决或者该往哪方面思考问题出在哪里。 引物是按文献合成的，Tm值分别为53.1和46，PCR体系也是按文献来的，用的酶也是同一公司的。  |
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