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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 引物设计

各位高手,知道一个酶的完整的cDNA序列,如何根据这个完整的cDNA序列设计引物,用于PCR扩增。

[ Last edited by gyesang on 2013-5-3 at 19:46 ]
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每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
24楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-05-06 00:32:56
因为你一开始酶切位点,保护碱基那些是和模板不匹配的.所以退火温度会低很多....
我是前5轮按照匹配的碱基算退火T,后30轮按照整个长度算.基本是提高了8度吧...没有非特异性条带咯..挺好的...

非常感谢!
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
26楼2013-05-06 10:55:18
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
崔永霞: 金币+1, 有帮助 2013-05-03 13:48:00
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-03 19:46:53
直接在这个cDNA的两端设计引物不就能扩出来了,加个酶切位点咯
一花一世界、一叶一菩提
2楼2013-05-03 12:32:49
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-03 12:32:49
直接在这个cDNA的两端设计引物不就能扩出来了,加个酶切位点咯

直接在两端设计的话,primer5显示不符合引物设计的要求,怎么办啊?
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
3楼2013-05-03 13:47:47
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-05-03 13:47:47
直接在两端设计的话,primer5显示不符合引物设计的要求,怎么办啊?...

先设计好,自己再编辑下加个酶切位点就好啊
一花一世界、一叶一菩提
4楼2013-05-03 14:08:10
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