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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 引物设计

各位高手,知道一个酶的完整的cDNA序列,如何根据这个完整的cDNA序列设计引物,用于PCR扩增。

[ Last edited by gyesang on 2013-5-3 at 19:46 ]
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每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by HTGe at 2013-05-04 11:25:16
一般大家都习惯用Primer5来设计引物,教程网上有,如果你找不到,留邮箱给我,我发给你。引物设计有 3 条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构, 再次引物 ...

非常感谢,我的邮箱是cuiyong.xia@163.com,以前没做过这方面的实验,有点迷茫,真的很感谢你这么热心!还有一个问题就是我设计好引物加完酶切位点之后就出现了引物二聚体和发夹结构,没加酶切位点之前是符合引物设计的原则的。
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
12楼2013-05-04 20:01:12
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
崔永霞: 金币+1, 有帮助 2013-05-03 13:48:00
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-03 19:46:53
直接在这个cDNA的两端设计引物不就能扩出来了,加个酶切位点咯
一花一世界、一叶一菩提
2楼2013-05-03 12:32:49
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-03 12:32:49
直接在这个cDNA的两端设计引物不就能扩出来了,加个酶切位点咯

直接在两端设计的话,primer5显示不符合引物设计的要求,怎么办啊?
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
3楼2013-05-03 13:47:47
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-05-03 13:47:47
直接在两端设计的话,primer5显示不符合引物设计的要求,怎么办啊?...

先设计好,自己再编辑下加个酶切位点就好啊
一花一世界、一叶一菩提
4楼2013-05-03 14:08:10
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