24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

淡墨melon

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 365.6
红花: 1
帖子: 103
在线: 23.9小时
虫号: 1972359
注册: 2012-09-04
性别: MM
专业: 蔬菜学与瓜果学

[求助] 新手SSR，不会区分目的条带，求帮助

1、SSR体系
10×Taq Buffer(15mM／L Mgcl2) 1.5ul
5 umol／L 引物                            各1ul
2U／ul 酶                                     0.5ul
2.5 dNTPs                                     1ul
50ng／ul DNA                               0.4ul
补水至  15ul

扩增程序
         94℃  3min
                  94℃  30s
                  55℃  60s
                     72℃ 90s
                     循环35次
         72℃ 7min
         4℃保存
2、跑胶是 8 %非变性聚丙烯凝胶， 280V  70min
   加3ul上样缓冲液，点样3ul
3、染色是银染法

为什么我的目的条带都聚集在一块，模糊着看不清楚。非特异性条带也多？

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

6%变性聚丙酰胺凝胶电泳SSR引物筛选已经有13人回复
新手刚做SSR，想请教下非变性胶的产物上样前是否需要在95度变性5min！已经有3人回复
求助，为什么SSR扩增产物琼脂糖跑出的条带会比maker最大分子量还要大呢？？已经有7人回复
PCR条带为什么会出现引物二聚体呀？目的条带没有出现。新手不大懂~~~ 已经有9人回复

活得精彩，不要有遗憾！！

1楼 2013-04-28 20:17:43

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yuantii

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 18.5
帖子: 7
在线: 1.5小时
虫号: 2510306
注册: 2013-06-16
专业: 蔬菜学与瓜果学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
淡墨melon(lqf808代发): 金币+2, 很好 2013-06-17 06:26:54
淡墨melon: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2013-06-21 09:34:45

从你的图发现几点问题：
凝胶有断裂现象，说明可能制胶的时候各个药品没有充分混匀，成分不均一会容易断胶；
底边很不整齐，说明琼脂糖封板的时候可能温度稍低或浓度过大，造成封板胶界面不平滑，这也是胶容易断的一个诱因；
条带差点就跑穿了，该电压下跑的时间稍长，最好是降低电压，增加电泳时间；
条带略有弥散，条带间区分不明显，可以通过降低电压使条带压的更细一些，进一步提高分辨率；
从梳孔来看，凝胶放的时间稍长，夏天气温高空气干燥，建议不要放置太长时间；
条带分辨率的问题，换用25齿的大梳子跑出来的图要漂亮得多，分辨率立马提升；
还是分辨率的问题，条件允许的话建议使用大板，泳道30cm左右的那种电泳槽，条带区分度会提高很多的。

希望对你有用。
码字不容易，内容更是经验之谈，看着赏点币吧，多谢啦