24小时热门版块排行榜    

查看: 2050  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

淡墨melon

铜虫 (小有名气)

[求助] 新手SSR,不会区分目的条带,求帮助

1、SSR体系
    10×Taq Buffer(15mM/L Mgcl2)    1.5ul
    5 umol/L 引物                              各1ul
   2U/ul 酶                                       0.5ul
    2.5 dNTPs                                      1ul
    50ng/ul DNA                                 0.4ul
   补水至  15ul

    扩增程序
            94℃  3min
                      94℃  30s
                      55℃  60s
                       72℃ 90s
                       循环35次
            72℃ 7min
            4℃保存
2、 跑胶是 8 %非变性聚丙烯凝胶, 280V  70min
      加3ul上样缓冲液,点样3ul
3、染色是银染法

为什么我的目的条带都聚集在一块,模糊着看不清楚。非特异性条带也多?
回复此楼
活得精彩,不要有遗憾!!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

icepearl

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.提高退火温度
2.减少DNA模板量
3.减少上样量
再不行,就要重新设计引物。
5楼2013-04-30 00:05:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

wuxingbo1986

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这是在筛引物?
2楼2013-04-29 11:02:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡墨melon

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuxingbo1986 at 2013-04-29 11:02:34
你这是在筛引物?

嗯。我在筛引物
活得精彩,不要有遗憾!!
3楼2013-04-29 16:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuxingbo1986

银虫 (小有名气)

筛引物的话,这比较正常,条带还算比较清楚,多态性还可以的,四份DNA来筛引物是不是有些少了?如果想清楚一些的话,体系应该不用调整,复筛的时候,调整一下退火温度试试看吧。
4楼2013-04-29 21:30:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿天大材料与化工(085600)总分338 +4 蔡大美女 2026-03-13 4/200 2026-03-18 22:47 by walc
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +8 Ncdx123456 2026-03-13 9/450 2026-03-18 14:40 by haxia
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 085600材料与化工求调剂 +5 绪幸与子 2026-03-17 5/250 2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家,不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
信息提示
请填处理意见