24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2079  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

淡墨melon

铜虫 (小有名气)

[求助] 新手SSR,不会区分目的条带,求帮助

1、SSR体系
    10×Taq Buffer(15mM/L Mgcl2)    1.5ul
    5 umol/L 引物                              各1ul
   2U/ul 酶                                       0.5ul
    2.5 dNTPs                                      1ul
    50ng/ul DNA                                 0.4ul
   补水至  15ul

    扩增程序
            94℃  3min
                      94℃  30s
                      55℃  60s
                       72℃ 90s
                       循环35次
            72℃ 7min
            4℃保存
2、 跑胶是 8 %非变性聚丙烯凝胶, 280V  70min
      加3ul上样缓冲液,点样3ul
3、染色是银染法

为什么我的目的条带都聚集在一块,模糊着看不清楚。非特异性条带也多?
回复此楼
活得精彩,不要有遗憾!!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

icepearl

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.提高退火温度
2.减少DNA模板量
3.减少上样量
再不行,就要重新设计引物。
5楼2013-04-30 00:05:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

wuxingbo1986

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这是在筛引物?
2楼2013-04-29 11:02:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡墨melon

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuxingbo1986 at 2013-04-29 11:02:34
你这是在筛引物?

嗯。我在筛引物
活得精彩,不要有遗憾!!
3楼2013-04-29 16:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuxingbo1986

银虫 (小有名气)

筛引物的话,这比较正常,条带还算比较清楚,多态性还可以的,四份DNA来筛引物是不是有些少了?如果想清楚一些的话,体系应该不用调整,复筛的时候,调整一下退火温度试试看吧。
4楼2013-04-29 21:30:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +18 硕星赴 2026-04-09 19/950 2026-04-10 02:08 by belle15
[考研] 268分085602化学工程调剂 +22 月照花林。 2026-04-09 22/1100 2026-04-10 00:29 by 孙小小12457
[考研] 22408调剂求助 +3 毂12 2026-04-09 5/250 2026-04-09 23:21 by zhouyuwinner
[考研] 080100力学316求调剂 +4 L_Hairui 2026-04-07 4/200 2026-04-09 21:17 by wutongshun
[考研] 085601初试330分找调剂 +8 流心奶黄包l 2026-04-09 8/400 2026-04-09 19:19 by 5268321
[考研] 调剂 化学 307 +11 73372112 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:52 by vgtyfty
[考研] 电子信息270求调剂 +11 terminal469 2026-04-07 11/550 2026-04-09 18:28 by hy861222
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所,有机化学356分找调剂 +11 Nadiums 2026-04-09 11/550 2026-04-09 18:04 by lijunpoly
[考研] 316求调剂 +3 想读研究生( ?∵ 2026-04-07 3/150 2026-04-09 17:31 by wp06
[考博] 材料方向考博,求推荐 +3 言语aaa 2026-04-05 4/200 2026-04-08 22:22 by nxgogo
[考研] 生物医药调剂|SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[考研] 08专硕275调剂 +5 AaAa7420 2026-04-05 5/250 2026-04-05 18:01 by jkddd
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] 278求调剂 +6 Yy7400 2026-04-03 6/300 2026-04-04 09:53 by zhangdingwa
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 本科985,专业0812分336求调剂 +4 莫莫很行 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:31 by zhq0425
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 338求调剂 +4 zzz,,r 2026-04-03 4/200 2026-04-03 16:39 by lijunpoly
信息提示
请填处理意见