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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
7baby1990: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-29 14:31:23
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-04-29 21:45:42
引用回帖:
8楼: Originally posted by 7baby1990 at 2013-04-28 23:27:28
应该是没出来,模板DNA浓度没有定,引物浓度是10pmol/ml...

DNA如果可能的话最好可能定一下大致的浓度。模板太多或者太少都对PCR的结果影响很大。用的是基因组DNA吗?nanodrop很容易测的,不行的话跑胶也可以检测到微克级别的基因组DNA。
此外,引物浓度一般是10μM=10pmol/μl。我觉得实在不可能是差1000倍。最终的引物在PCR体系里是0.1-1μM。我感觉你的引物用的有些多。
引物的退火温度与PCR体系里的镁离子浓度有关,常用的镁离子终浓度是1.5mM。不知道你使用的镁离子stock的浓度,你可以检查一下终浓度是否合适。不行的话你可以试试降低退火温度。
11楼2013-04-29 00:30:36
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7baby1990

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-29 00:30:36
DNA如果可能的话最好可能定一下大致的浓度。模板太多或者太少都对PCR的结果影响很大。用的是基因组DNA吗?nanodrop很容易测的,不行的话跑胶也可以检测到微克级别的基因组DNA。
此外,引物浓度一般是10μM=10pmol ...

引物浓度我写错了,就是10pmol/ul
12楼2013-04-29 14:31:12
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billtsu

木虫 (正式写手)

木木

引用回帖:
9楼: Originally posted by 7baby1990 at 2013-04-28 23:29:55
49度会不会低了,我那个引物单子上上游引物27f的Tm是60度,下游引物1492r的Tm是57度好像...

不会,引物单子上的Tm值要按照实际情况修正,只是一个参考。49度,我一直都是这个温度
啊木
13楼2013-04-29 14:35:32
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雨辰love

铁杆木虫 (正式写手)

没p出来,引物加多了
14楼2013-04-29 15:08:23
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