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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何在总RNA上面连接上polyA尾巴呢？
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人

[求助] 如何在总RNA上面连接上polyA尾巴呢？

如题，答案完美的BB全给
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1楼 2013-04-27 17:22:15
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lxg133298

荣誉版主 (文学泰斗)

Stay Hungry. Stay Foolish.

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
最多给10bb哦
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四时院中竹叶缘，三更梦里墨书香，几度浮生度日暮，一溪烟月枕中藏，雨解情思风锁门，雾迷书亭幻入真。
2楼2013-04-27 17:24:29
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祯嗳溢誓

荣誉版主 (文坛精英)

本只已有主

优秀版主优秀版主
姐姐辛苦了，帮顶
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珍惜时间珍爱自己珍重亲情珍视友情潜心学习努力提升锁定目标拼搏前程
3楼2013-04-27 17:28:13
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runhuahan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永远不知道(amisking代发): 金币+3, 感谢 2013-04-27 20:04:48
呵呵呵， 有个试剂盒可以，Epicentre的，叫Poly(A) Polymerase Tailing Kit，货号是：Cat. No. PAP5104H。我做3‘RACE时候用的，挺好用的。
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4楼2013-04-27 18:06:27
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人
引用回帖:
4楼: Originally posted by runhuahan at 2013-04-27 18:06:27
呵呵呵， 有个试剂盒可以，Epicentre的，叫Poly(A) Polymerase Tailing Kit，货号是：Cat. No. PAP5104H。我做3‘RACE时候用的，挺好用的。

用这个就可以直接在植物总RNA上面加尾巴吗？我可不是DNA上面加啊，你再确认一遍
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5楼2013-04-27 22:27:12
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runhuahan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
永远不知道: 金币+1, 哪个官网？能不能说详细点啊 2013-04-28 12:56:35
引用回帖:
4楼: Originally posted by runhuahan at 2013-04-27 18:06:27
呵呵呵， 有个试剂盒可以，Epicentre的，叫Poly(A) Polymerase Tailing Kit，货号是：Cat. No. PAP5104H。我做3‘RACE时候用的，挺好用的。

我用的时候是在细菌的总RNA3‘端加的poly（A），植物的行不行你去二批centre的官网上看看protocol吧，应该可以
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6楼2013-04-27 22:44:00
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永远不知道: 金币+5, 你能把方法告诉我吗？ 2013-04-28 12:55:53
从miRNA的real time说起吧，
用实时定量PCR检测miRNA的表达，通常有两种方法：
1 是茎环法
2 polyA加尾法 这里就涉及到如何在RNA上加polyA尾的问题了，可以用
Poly A Polymerase这个酶，这个酶可以对RNA 3’端进行合成“Poly A”尾，这个酶一般公司都有得买，楼主可以试试

如果楼主非要连接已经合成好的polyA的话，只能试着用RNA ligase了

[ Last edited by gyesang on 2013-4-28 at 02:42 ]
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2013-04-28 02:40:22
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runhuahan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by runhuahan at 2013-04-27 22:44:00
我用的时候是在细菌的总RNA3‘端加的poly（A），植物的行不行你去二批centre的官网上看看protocol吧，应该可以...

epicetre,Illumina的一个子公司，百度就行了
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8楼2013-04-28 18:34:29
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
中山大学在核酸研究上发的一篇文章Identification of 20 microRNAs from Oryza sativa
分离出small RNA后，用poly(A) polymerase 给3’端加polyA尾做为加3’端接头
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9楼2013-04-28 18:42:05
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chnfhjxl

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永远不知道(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-29 14:01:55
我买的是AMBION的poly（a）聚合酶试剂盒，很好用，基本上每个RNA都可以加到200bp的a尾，但是感觉不便宜，貌似也有好多别的牌子的，我没用过就不好说了。官网地址https://products.appliedbiosyste ... e2&catID=603315
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10楼2013-04-29 11:56:14
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