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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 反相制备柱高效冲洗残留样品的方法？
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zhuht888

木虫 (小有名气)

[求助] 反相制备柱高效冲洗残留样品的方法？

RP-HPLC制备过程中，样品（小分子肽，含较多羟基）吸附性很强，并在柱子中降解成杂质，造成下一针洗脱样品时引入此杂质，纯乙腈、异丙醇、0.1%TFA乙腈、PBS缓冲盐pH3.0/8.0+60%乙腈、PBS缓冲盐+0.5M高氯酸钠pH3.0+60%乙腈……都不能完全冲洗干净，求高人指教更行之有效的方法！
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1楼 2013-04-25 10:39:14
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悠悠007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议冲柱子不要用含缓冲盐的流动相，缓冲盐本身容易残留在柱子里，造成柱子堵塞。不知道你的柱子直径是多大的？如果是9.4mm的，可以用0.1mL的甲醇反冲柱子20 min试试，柱子的另一端不接检测器，直接流出。
每天做样前冲洗柱子，做完样后用80%的水+20%的甲醇冲洗柱子，然后在用100%甲醇冲。尽量不用含磷酸盐的缓冲液，如果必须要用，一定放在A相，用完后及时冲洗柱子，进样量不要太大，进2针就及时冲下柱子再接着做。
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3楼2013-04-25 12:57:59
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飞翔的石头

银虫 (正式写手)
DMF加磷酸调PH至2.5~3.0，值得一试！
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我学着不去担心得太远，不计划太多反而能勇敢冒险
2楼2013-04-25 12:42:30
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zhuht888

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 悠悠007 at 2013-04-25 12:57:59
建议冲柱子不要用含缓冲盐的流动相，缓冲盐本身容易残留在柱子里，造成柱子堵塞。不知道你的柱子直径是多大的？如果是9.4mm的，可以用0.1mL的甲醇反冲柱子20 min试试，柱子的另一端不接检测器，直接流出。
每天做样 ...

我使用的是DAC100mm的C18填料的制备柱，我们的产品是用纯甲醇冲洗下来的，70%的甲醇冲不下样品，80%/90%的甲醇洗脱液体积太大！
但用缓冲盐体系冲洗后，会有很多残留的产品出来，纯甲醇不能冲洗下来它们！
但似乎还有残品残留柱子里。
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4楼2013-04-25 14:30:59
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zhuht888

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞翔的石头 at 2013-04-25 12:42:30
DMF加磷酸调PH至2.5~3.0，值得一试！

浓度多少？有人建议说是用不要高于5%的DMF冲洗试试，不建议DMF太高比例！还说反相柱最好不要用丙酮和二氯甲烷冲洗！
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5楼2013-04-25 14:33:10
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