| 查看: 3692 | 回复: 1 | ||
80003066金虫 (正式写手)
|
[求助]
为什么用PEG沉淀不下来噬菌体呢？
|
|
采用分子克隆实验指南第三版的方法，用PEG沉淀噬菌体 实验方法简单描述如下：1.dna 和rna酶消化宿主细菌来源的遗传物质；2.加入氯化钠，终浓度为1M，冰浴1；3. 4摄氏度，11000g，10min，离心出去细菌碎片；4. 加入PEG，终浓度为10%，搅拌溶解；5. 将溶液转移至离心管中，冰浴冷却过夜，以沉淀噬菌体颗粒；6. 4摄氏度，11000g，20min，回收沉淀噬菌体，去上清，倒置离心管；7. 用SM buffer 溶解沉淀，室温放置至少1h；8.加入等体积的氯仿抽提PEG和细菌碎片，温和振荡30s后，4摄氏度，3000g，离心20min，以分离亲水相，回收含有噬菌体的亲水相。 噬菌体原来的效价为10的10次方数量级，上述操作后，效价降低为10的8次方数量级。做了噬菌体的氯仿实验，结果显示噬菌体对氯仿不敏感。以上实验方法第6步，上清液效价也为10的10次方数量级。 即PEG没有有效沉淀噬菌体？请问什么原因呢？请帮忙指点为谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
有没有人能给点建议
已经有5人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有12人回复
-
实验室接单子
已经有7人回复
-
全日制（定向）博士
已经有5人回复
-
萌生出自己或许不适合搞科研的想法，现在跑or等等看？
已经有4人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有4人回复
-
参与限项
已经有3人回复
-
对氯苯硼酸纯化
已经有3人回复
-
所感
已经有4人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 据说PEG高分子链和聚丙烯酸高分子链有氢键相互作用，会导致沉淀发生，是这样的吗？
已经有6人回复
- PMMA-PEG-PMMA用什么做沉淀剂
已经有18人回复
- PEG-PLGA的沉淀剂选择
已经有4人回复
- 【求助】peg 在乙醚中沉淀问题
已经有19人回复
- 【求助】小分子量PEG沉淀问题
已经有10人回复
kkf278895737
木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1782
- 散金: 91
- 红花: 1
- 帖子: 193
- 在线: 97.1小时
- 虫号: 518962
- 注册: 2008-03-05
- 性别: MM
- 专业: 生化分析及生物传感
2楼2018-11-12 14:45:59