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80003066金虫 (正式写手)
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[求助]
为什么用PEG沉淀不下来噬菌体呢？
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采用分子克隆实验指南第三版的方法，用PEG沉淀噬菌体 实验方法简单描述如下：1.dna 和rna酶消化宿主细菌来源的遗传物质；2.加入氯化钠，终浓度为1M，冰浴1；3. 4摄氏度，11000g，10min，离心出去细菌碎片；4. 加入PEG，终浓度为10%，搅拌溶解；5. 将溶液转移至离心管中，冰浴冷却过夜，以沉淀噬菌体颗粒；6. 4摄氏度，11000g，20min，回收沉淀噬菌体，去上清，倒置离心管；7. 用SM buffer 溶解沉淀，室温放置至少1h；8.加入等体积的氯仿抽提PEG和细菌碎片，温和振荡30s后，4摄氏度，3000g，离心20min，以分离亲水相，回收含有噬菌体的亲水相。 噬菌体原来的效价为10的10次方数量级，上述操作后，效价降低为10的8次方数量级。做了噬菌体的氯仿实验，结果显示噬菌体对氯仿不敏感。以上实验方法第6步，上清液效价也为10的10次方数量级。 即PEG没有有效沉淀噬菌体？请问什么原因呢？请帮忙指点为谢！ |
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